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    單核細(xì)胞分離

    放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-28

    鐵粉吸附法

    1.材料及試劑

    (1)鐵粉或羰基鐵粉(Atomergic chemetals)99%的純度,顆粒小于60µm(Goodfellow Metals)。

    (2)強(qiáng)磁鐵(馬蹄形)。

    (3)一塊小棒狀磁鐵(約1cm長)。

    (4)毛細(xì)吸管等。

    2.操作方法

    (1)稱取一定量的鐵粉,一般為10g,用100ml生理鹽水洗滌4次,去除任何可溶性有毒物質(zhì)。在倒去鹽水時,用強(qiáng)磁鐵吸住鐵粉。

    (2)用50ml生理鹽水混懸鐵粉。搖勻后,分裝于10個瓶中,包扎瓶口,121℃滅菌20min,拿出后立即輕輕搖勻,防止鐵粉結(jié)塊,儲藏備用。

    (3)臨用前,倒去瓶中的生理鹽水,加入適量的單個核細(xì)胞懸液(3ml~5ml,細(xì)胞總數(shù)為8×107個/瓶)。37℃溫育45min,中間不時晃動,使鐵粉懸浮起來。

    (4)加入一塊小磁鐵棒于瓶中,讓其吸住鐵粉以及附著在鐵粉上的細(xì)胞。

    (5)倒出懸液,此懸液主要是淋巴細(xì)胞,離心,收集。

    (6)在鐵粉瓶內(nèi)倒入一定量的Hank’s液,用力振搖后,以強(qiáng)磁鐵吸附,幾分鐘后,倒出液體。

    (7)2 000r/min離心液體,管底即為單核細(xì)胞。


    玻璃板吸附法

    將分離的單個核細(xì)胞傾于無菌潔凈的玻璃平皿內(nèi),置37℃ 30 min~40min,用毛細(xì)吸管輕輕吸取懸液,即為淋巴細(xì)胞。用適量的Hank’s液沖洗平皿,收獲即為單核細(xì)胞懸液。

     

     

     
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