材料與試劑
以布氏桿菌病試管凝集反應(yīng)為例。
1.試管(1cm×8cm)、試管架、恒溫箱、吸管等。
2.布氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、布氏桿菌試管凝集用抗原。
3.布氏桿菌病待檢血清。
4.0.5%石炭酸生理鹽水。
操作方法
1.試管4支,另取對照管3支,共7支試管,置于試管架上。如檢多份血清,則對照只需做一份。
2.按表4-1加入0.5%石炭酸生理鹽水,另用1ml的刻度吸管吸取0.2ml待檢血清加入第一試管中。反復(fù)吹吸5次混勻。
3.以第1試管中吸取1.50ml棄之,再吸取0.50ml加入第2試管中,第1試管尚剩0.50ml。按第1管的辦法吹吸混勻第2管,再從第2管吸取0.50ml放入第3管,以此類推,將第4管混勻后,棄去0.50ml。第5管只加0.5%石炭酸生理鹽水0.50ml,第6管加1︰25稀釋的布氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清,第7管加1︰25稀釋的布氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陰性血清0.50ml。
4.將購買的布氏桿菌凝集抗原以0.5%石炭酸生理鹽水做1︰20稀釋,使每ml含菌為8億,每管加0.50ml。
5.全部加畢后,一起振搖,混勻,放入37℃度溫箱12h~14h,取出后至室溫2h~4h,觀察并記錄結(jié)果。
結(jié)果判定
結(jié)果用“ ”表示反應(yīng)強(qiáng)度。
:液體完全透明,菌體完全被凝集呈傘狀沉于管底。
:液體透明,菌體基本被凝集沉于管底。
:液體不甚透明,管底有明顯的凝集沉淀。
:液體透明度不明顯或不透明,有不明顯的沉淀或有沉淀的痕跡。
— :液體不透明,呈均勻混濁,管底無凝集。有時(shí)有少量菌體集中于管底中心,呈臍狀,但振搖時(shí),立即散開呈均勻渾濁。
以出現(xiàn)“ ”的最高血清稀釋倍數(shù)即為該份血清的效價(jià),又叫凝集價(jià)。大動物(馬,牛,駱駝等)以凝集價(jià)1︰100以上判為陽性,1︰50的凝集價(jià)判為可疑。中小動物(豬,羊,狗等)以凝集價(jià)1︰50以上判為陽性,1︰25的凝集價(jià)判為可疑。
如對照管不符合要求時(shí),試管須廢棄重做。
注意事項(xiàng)
1.結(jié)果為可疑時(shí),隔2~3周后采血重做。陽性畜群,重檢時(shí)仍為可疑,可判陽性。對同群中既無臨床癥狀又無凝集反應(yīng)陽性者,馬、豬重檢仍為可疑者,判陰性,牛、羊血清重檢仍為可疑者,可判為陽性,或以補(bǔ)反等核對。
2.對陰性畜群,初檢為可疑,復(fù)檢仍為可疑(即效價(jià)不升高者),為慎重起見,可進(jìn)行補(bǔ)反或細(xì)菌分離,如補(bǔ)反和細(xì)菌分離均為陰性者,可判為陰性。
3.化驗(yàn)結(jié)果通知畜主時(shí),必須注明凝集價(jià)。
4.凝集反應(yīng)用的血清必須新鮮,過度溶血的血清也不好。用0.5%石炭酸防腐的血清,也最好在15日內(nèi)檢測完。
5.在試管凝集反應(yīng)中,抗原抗體的比例是非常重要的,必須進(jìn)行摸索,特別是在新建立一項(xiàng)試管凝集反應(yīng)時(shí),如抗體比例過大,即稀釋倍數(shù)較小,可出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象,即在“ ”的前幾管可出現(xiàn)“—”或低于“ ”的反應(yīng)強(qiáng)度,這種現(xiàn)象就叫前帶現(xiàn)象。如進(jìn)行馬流產(chǎn)傷寒沙門氏血清試管凝集反應(yīng)時(shí),就可能出現(xiàn)這種前帶現(xiàn)象。