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3M 乳酸菌測(cè)試片操作以及判讀
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2*MRS的操作步驟
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 1、按說(shuō)明書要求的2倍用量制備2×MRS肉湯。例如：如果說(shuō)明書要求1L水中加入55gMRS,則2×MRS則為1L水中加入110gMRS. |
 2、用標(biāo)準(zhǔn)稀釋液制備1：10樣品稀釋液，該樣品稀釋液可用于檢測(cè)其他微生物。 |
 3、用1mL 3M電子加樣器將1：10樣品稀釋液做1：2稀釋。先取0.5mL肉2×MRS肉湯，然后再吸取0.5mL 1:10樣品稀釋液，混勻后即可獲得含單倍 MRS的1：20樣品稀釋液。 |
 4、接種：在PAC檢測(cè)片上接種1mL 1：20樣品稀釋液（0.5mL 1：10標(biāo)準(zhǔn)稀釋液+0.5mL 2×MRS肉湯＝1:20含單倍MRS的樣品稀釋液）。 |
 5、培養(yǎng)：厭氧培養(yǎng)測(cè)試片。將檢測(cè)片透明膜一面朝上放入?yún)捬豕拗�，疊放數(shù)量不得超過(guò)20片。如果檢測(cè)片超過(guò)20片，可在同一罐中用一個(gè)堅(jiān)硬的分隔器將檢測(cè)片分開培養(yǎng)。將厭氧罐放入30℃～35℃（86℃～95℉）培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48＋3h. |
 6、判讀：PAC測(cè)試片可在標(biāo)準(zhǔn)菌落計(jì)數(shù)器或其他放大光源下計(jì)數(shù)。測(cè)試片賞的菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)（20）即為每毫升樣品中酸乳菌數(shù)。詳見判讀手冊(cè)。 |
| 4*MRS肉湯的操作程序 | |
| 1、 按說(shuō)明書要求的4倍用量制備4*MRS肉湯 2、 用標(biāo)準(zhǔn)稀釋液制備1：10樣品稀釋液（11g/99mL或25g/225mL）。取8mL供其它種類的微生物檢測(cè)用。 3、 將4*MRS肉湯加入1：10標(biāo)準(zhǔn)樣品稀釋液中，將獲得含0.5 MRS的樣品稀釋液。 * 如果稀釋液中含有11g樣品、99mL標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，接種其它微生物測(cè)試片后，再加入18mL 4*MRS肉湯。 PAC測(cè)試片上生長(zhǎng)的菌落數(shù)乘以11即為最終結(jié)果（個(gè)/g）。 * 如果稀釋液中含有25g樣品、255mL標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，接種其它微生物檢測(cè)片后，再加入41mL 4*MRS肉湯。 PAC測(cè)試片上生長(zhǎng)的菌落數(shù)乘以11即為最終結(jié)果（個(gè)/g）。 |
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 1、制備至少1：10或更高稀釋度的樣品稀釋液。稱量食品樣品于WirPak取樣袋、均質(zhì)袋、稀釋瓶或其它適合的消容器中。 |
 2、加入適當(dāng)?shù)娜鉁♂屢�，稀釋液的配置方法根�?jù)說(shuō)明書制備。如果使用一種1：10稀釋液檢測(cè)多種微生物，3M公司提供了更為簡(jiǎn)便的多種菌檢測(cè)程序（見前頁(yè)）。 |
 3、如果需要進(jìn)行多倍稀釋，肉湯稀釋液只能用于最終稀釋步驟。初始稀釋可使用標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，包括磷酸鹽緩沖液（ID）F磷酸鹽緩沖液，0.0425g/L KH2POI4 Ph7.2) 、0.1%蛋白膠水，蛋白膠鹽稀釋液（ISO方法6887）、蛋白膠水緩沖液（ISO方法6579）、生理鹽水（0.85～0.90％），不含亞硫酸氫鹽的 Letheen肉湯或蒸餾水，每步稀釋都應(yīng)充分混勻。 |
 4、接種：按操作說(shuō)明接種1.0mL樣品稀釋液于Petrifilm |
 5、培養(yǎng)：厭氧培養(yǎng)測(cè)試片。將測(cè)試片透明面朝上放入GASPak厭氧罐中，疊放數(shù)量不得超過(guò)20片。如果檢測(cè)片超過(guò)20片，可在同一罐中用一個(gè)堅(jiān)硬的分隔器將檢測(cè)片分開培養(yǎng)。將厭氧罐放入30℃～35℃（86℉～95℉）培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48＋3h. |
 6、判讀：Petrifilm: PAC測(cè)試片可在標(biāo)準(zhǔn)菌落計(jì)數(shù)器或其他放大光源下計(jì)數(shù)。測(cè)試片賞的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，可獲得每毫升樣品中酸乳菌落數(shù)。詳見判讀手冊(cè)。 |
| 判讀手冊(cè) | |
 Count=238使用PAC測(cè)試片,用MRS肉湯稀釋樣品和厭養(yǎng),可促進(jìn)同型發(fā)酵的乳酸菌生長(zhǎng). 圖1為同型發(fā)酵的乳酸菌落(不帶氣泡)的例子. |
 Count=30測(cè)試片中有導(dǎo)型發(fā)家哦的乳酸菌(產(chǎn)氣)和同型發(fā)酵的乳酸菌.用MRS肉湯稀釋, 使異型發(fā)酵的乳酸菌在暗影背景下有明顯氣泡產(chǎn)生(見黑圈1) 生長(zhǎng)區(qū)邊緣的異型發(fā)酵乳酸菌菌落大約在1/4英寸時(shí),可能不產(chǎn)生可視的氣泡(見黑圈2). |
 Count=0圖3是用MRS內(nèi)湯為稀釋液接種PAC測(cè)試片作為對(duì)照,以MRS為稀釋液及厭氧培養(yǎng)將在測(cè)試片上產(chǎn)生一個(gè)稍顯暗色的淺色圓形生長(zhǎng)區(qū)域. |
 Count=60測(cè)試片最適宜計(jì)數(shù)范圍是25-250個(gè)菌落,計(jì)數(shù)所有菌落,不管其大小和顏色深淺. |
 Estimated count=440 測(cè)試片面積約為20cm2 .當(dāng)菌落數(shù)超過(guò)250個(gè)(如圖5所示)時(shí),可估算菌落數(shù).選擇其中一個(gè)或數(shù)個(gè)有代表性菌落的小方格(1cm2 ),計(jì)算平均菌落數(shù),在乘以20可得到測(cè)試片上的菌落總數(shù). |
 Count=TNTC(Estimated count=106)當(dāng)菌落數(shù)多不可計(jì)(tntc)時(shí),整個(gè)生長(zhǎng)區(qū)可能變?yōu)榉奂t色,如圖6所示.將測(cè)試片與以MRS肉湯作對(duì)照的測(cè)試片做比較,因?yàn)闇y(cè)試片的顏色變化是微小的(見圖3),此種情況下樣品需作進(jìn)一步稀釋. |
 Count=TNTC(Estimated count=106)仔細(xì)觀察,在測(cè)試片生長(zhǎng)區(qū)中心和邊緣處可見針尖大小的菌落,計(jì)錄為TNTC結(jié)果. |
 Conut=TNTC(Estimated count=108)當(dāng)菌落數(shù)很多時(shí),許多針尖大小的菌落會(huì)環(huán)繞在生長(zhǎng)區(qū)邊緣,記錄為TNTC. |
 Count=TNTC圖9是TNTC的又一個(gè)例子.同型發(fā)酵乳酸菌菌落(無(wú)氣泡產(chǎn)生)(黑圈1)與異型發(fā)酵乳酸菌菌落(有氣泡產(chǎn)生)(黑圈2)同時(shí)出現(xiàn). |
 Count=52人為的氣泡可能是不適當(dāng)?shù)慕臃N所致,他們形狀不規(guī)則,且不與菌落相連接 |
