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    3M大腸桿菌/大腸菌群快速檢驗測試片操作以及判讀

    放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-05-15
    3M大腸桿菌/大腸菌群快速檢驗測試片操作以及判讀
    一、測試大腸桿菌/大腸菌群 操作方法  
    1、未開封時,冷藏于≤8℃(≤46℉),并在保存期內(nèi)用完,高溫度時,凝固水可以排除,包裝物最好于室溫啟開。 2、已開封的,將封口以膠帶封緊。
    3、保存再封的袋于≤25℃(≤77℉)和溫度<50%,不要冷藏已開啟的包裝袋,并于一個月內(nèi)使用完。 4、制備1:10和更大稀釋的食物樣品稀釋液,稱取或吸取食物樣品,置入適宜的無菌容器內(nèi),如均質(zhì)袋、稀釋瓶、WhirlPak bag或者其他滅菌容器內(nèi).

    5、加入適量的無菌稀釋液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4調(diào)PH7.2) 、0.1%的蛋白膠水(ISO方法6887) 、緩沖蛋白膠水(ISO方法6579) 、鹽溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸餾水.

    但不可用含有枸櫞酸鹽、bisulfite or thiosulfate的緩沖液. 因為它能抑止菌生長。

     

    6、攪拌或均質(zhì)樣品
    酸性樣品的稀釋液用INNaoH調(diào)PH6.5-7.5,對堿性樣品的稀釋液用IN HCL調(diào)PH6.5-7.5。
    7、將測試片置于平坦表面處,揭開上層膜。 8、使用吸管將1ml樣液垂直滴加在測試片的中央處。
    9、細心將上層膜緩慢蓋下,避免有氣光泡產(chǎn)生,切勿使上層膜直接落下。 10、使用壓板(平面底朝下)放置在上層膜中央處。
    11、輕輕的壓下,使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上,切勿扭轉(zhuǎn)壓板。 12、拿起壓板,靜置至少1分鐘以使培養(yǎng)基凝固。
    13、測試片的透明面朝上,可堆疊至20片,對有一定濕度養(yǎng)箱能保持最少份損失是需要的。 14、可目視及用標準菌落計數(shù)器或其它的照明放大鏡計數(shù),并可參考判讀卡計算菌落數(shù)。
    15、可以分離菌落作進一步鑒定,即掀起上層膜,由培養(yǎng)膠上挑取單個菌落。  
    二、測試大腸桿菌/大腸菌群 判讀方法  

    Petrifilm ColiformTM Coliform測試片含有VRB培養(yǎng)劑 (Violet Red Bile),一種冷水可溶性的凝膠劑和四唑翁(tetrazollium)指示劑,可增強菌落計數(shù)效果。絕大多數(shù)E .coli(約占97%)能產(chǎn)生-葡萄糖甘酸酶與培養(yǎng)基中的指示劑反應(yīng),產(chǎn)生藍色沉淀環(huán)繞在大腸桿菌菌落周圍,表面覆蓋的膠膜,可留住發(fā)酵乳糖的大腸菌群產(chǎn)生的氣體,約有95%的大腸桿菌產(chǎn)生,形成藍色或深藍上菌落并有氣泡相連接,氣泡大小約為1個菌落直徑。

    AOAC和FDA細菌學(xué)分析手冊(RAM)規(guī)定大腸菌群為革蘭氏陰性桿菌,發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。大腸菌群菌落在Petrifilm CC測試片上生長產(chǎn)酸,PH指示劑使培養(yǎng)基顏色變深,在紅色菌落周圍有氣泡者,為大腸菌群細菌。大腸桿菌鑒定,在不同國家可以有變更(見培養(yǎng)時間和溫度部分指示)。

    該測試片不能單獨測定E.coli O157,像大多數(shù)其他E.conliform培養(yǎng)基一樣,它沒有專門指示是否有任何0157菌株的存在.
    AOAC確認的方法:
    E.coli=49(藍色菌落帶有氣泡)
    Total coliform=87(紅色和藍色菌落帶有氣泡)
    No growth=0
    注意圖2到8 培養(yǎng)基顏色的變化,隨著E.coliform菌數(shù)增多,培養(yǎng)基顏色變成暗紅色或藍紫色,背景的泡(沫)為培養(yǎng)基現(xiàn)象,不是大腸桿菌或大腸菌群生長結(jié)果,見方框1.
    E.coli connt=13
    Total coliform count=28
    Petrifilm Ec測試片菌落數(shù)適宜計數(shù)范圍是15-150,不要計算圓形培養(yǎng)基外的菌落,因為泡棉上已不含選擇性培養(yǎng)基.見圓圈!
    E.coli count=3
    任何藍色菌落(藍色到紅藍色)表明有E.coli存在,正面照明增強形成藍色沉淀菌落的測定,圓圈1示為背面光照的紅藍菌落,圓圈2示為同一菌落的正面光照藍色沉淀更明顯些.
    E.coli count=17
    Estimated total coliform count =150
    測試片面積約為20cm2,當菌落數(shù)超過150 個,為了估計菌落數(shù)可選擇其中一個或數(shù)個有代表性菌落的小方格(1cm2 )計算平均菌落數(shù),再乘以20方可得到整個測試片上的菌落數(shù)
    Actual count~106
    Petrifilm EC測試片菌落無法計數(shù)時至少有下列現(xiàn)象之一:
    1.很多小菌落
    2.有許多氣泡
    3.培養(yǎng)基的顏色變深,由紅色到藍紫色
    Actual count~108
    高數(shù)量的大腸桿菌可以引起長生區(qū)變成藍紫色.
    Presumptive E.couli count~8
    Estimated total coliform count~108
    當大腸菌群數(shù)>108 時,一些大腸桿菌菌株可能產(chǎn)生少量氣體和不明確的藍色菌落.所有不帶氣泡的藍色菌落和(或)藍色環(huán)帶,推定為大腸桿菌需計數(shù),如有必要需挑取不帶氣泡的藍色菌落,進行確認試驗.
    Actual count~108
    當有大量的非大腸菌群細菌如假單胞菌屬細菌存在時,petrifilm EC 測試片培養(yǎng)基顏色呈黃色.
    Total coliform count=3
    食物顆粒為不規(guī)則形狀,且不帶氣泡.
    Total coliform count=78
    氣泡可有不同形狀,氣泡可使菌落撐散,使菌落輪廓似氣泡,見圓圈1和2.
    人為氣泡可能是不當?shù)牟僮魉?或是來自樣品內(nèi)的氣體,它們成不規(guī)則形狀,且不與菌落相連接.見圓圈3

    例如1-10示為不同形狀氣泡與菌落連接情況,所有菌落應(yīng)記數(shù)。
     
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