可溶性抗原,如蛋白質(zhì)、多糖、類脂質(zhì)和病毒等,與相應(yīng)抗體結(jié)合后,抗原抗體復(fù)合物可以結(jié)合補(bǔ)體,但這一反應(yīng)肉眼不能察覺,如再加入紅細(xì)胞和溶血素,即可根據(jù)是否出現(xiàn)溶血反應(yīng)來判定反應(yīng)系統(tǒng)中是否存在相應(yīng)的抗原或抗體。這個(gè)反應(yīng)就是補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。
補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)是一種古老的血清學(xué)技術(shù),Bordet和Gengou在1901年設(shè)計(jì)這一試驗(yàn),由于有敏感性高和適應(yīng)性廣的優(yōu)點(diǎn),盡管操作繁雜,目前仍被有效地應(yīng)用。
補(bǔ)體存在于哺乳動(dòng)物血清中,各種動(dòng)物比較,豚鼠血清中補(bǔ)體含量最高,成分較全,效價(jià)穩(wěn)定,采取方便,故通常將豚鼠的全血清作為補(bǔ)體。
補(bǔ)體的作用為能與抗原—抗體復(fù)合物結(jié)合,但不能與抗原單獨(dú)結(jié)合,也不易與抗體單獨(dú)結(jié)合;補(bǔ)體的作用沒有特異性,能與任何一組抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。它能與紅細(xì)胞(抗原)和溶血素(抗體)的復(fù)合物結(jié)合,引起紅細(xì)胞破壞(溶血),也能與細(xì)菌、病毒成分及其相應(yīng)抗體的復(fù)合物結(jié)合。
溶血反應(yīng)
將紅細(xì)胞多次注射于動(dòng)物(如將綿羊紅細(xì)胞多次免疫家兔)可使之產(chǎn)生相應(yīng)的抗體(溶血素),這種抗體與紅細(xì)胞結(jié)合,若有補(bǔ)體存在時(shí),則紅細(xì)胞被溶解,這種現(xiàn)象稱為溶血反應(yīng)。紅細(xì)胞和溶血素被稱為溶血系統(tǒng),常在補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)中用作測(cè)定有無補(bǔ)體游離存在的指示劑。
補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)及其原理
可溶性抗原,如蛋白質(zhì)、多糖、類脂、病毒等或者顆粒性抗原,與相應(yīng)抗體結(jié)合后,其抗原抗體復(fù)合物可以結(jié)合補(bǔ)體,但這一反應(yīng)肉眼不能覺察。如再加入紅細(xì)胞和溶血素,即可根據(jù)是否出現(xiàn)溶血反應(yīng)來判定反應(yīng)系統(tǒng)中是否存在相對(duì)應(yīng)的抗原和抗體。此反應(yīng)即為補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。
補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)中的抗體主要是IgG和IgM。
反應(yīng)的原理在于補(bǔ)體本身沒有特異性,能與任何抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。以檢查鼻疽病為例,先向試管中加入已知的抗原(鼻疽菌的浸出液),再加入被檢馬匹的血清(抗體)和豚鼠血清(補(bǔ)體),這三種成分稱為反應(yīng)系統(tǒng)或溶菌系統(tǒng)。如果該馬是鼻疽病馬,則血清中有抗鼻疽桿菌的抗體。抗原和抗體發(fā)生結(jié)合,吸附補(bǔ)體。如果該馬沒有鼻疽病,血清中沒有抗鼻疽菌的抗體,則不能形成抗原抗體復(fù)合物,不能吸附補(bǔ)體,則補(bǔ)體游離存在。
由于許多抗原是非細(xì)胞性的,而且上述抗原、抗體和補(bǔ)體三種成分都是用生理鹽水或緩沖鹽水稀釋的比較透明的液體,所以補(bǔ)體不論是否被結(jié)合,都不能直接看到,故無法判定。
因此,在反應(yīng)系統(tǒng)的三種成分作用一定時(shí)間之后,再向其中添加指示系統(tǒng)—綿羊紅細(xì)胞和特異性抗體溶血素。如果抗原和病馬血清中抗體特異性結(jié)合,吸附補(bǔ)體,沒有游離補(bǔ)體存在,加入指示系統(tǒng),因無補(bǔ)體參加,不發(fā)生溶血,這種情況稱為補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)陽性,即該馬患有鼻疽;反之,則該馬未患鼻疽病。
反應(yīng)特點(diǎn)
補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)操作繁雜,且需十分細(xì)致,反應(yīng)的各個(gè)因子的量必須有恰當(dāng)?shù)谋壤。特別是補(bǔ)體和溶血素的用量。補(bǔ)體的用量必須恰如其分,例如:抗原抗體呈特異性結(jié)合,吸附補(bǔ)體,本應(yīng)不溶血,但因補(bǔ)體過多,多余部分轉(zhuǎn)向溶血系統(tǒng),發(fā)生溶血現(xiàn)象。又如抗原抗體為非特異性,抗原抗體不結(jié)合,不吸附補(bǔ)體,補(bǔ)體轉(zhuǎn)向溶血系統(tǒng),應(yīng)完全溶血,但由于補(bǔ)體過少,不能全溶,影響結(jié)果判定。故補(bǔ)體量必須恰如其分。溶血素量也有一定影響,例如陰性血清,應(yīng)完全溶血,但溶血素量少,溶血不全,可被誤認(rèn)為弱陽性。另外,這些因子的用量又與其活性有關(guān):活性強(qiáng),用量少;活性弱,用量多,故在本試驗(yàn)之前,必須精確測(cè)定溶血素效價(jià)、溶血系統(tǒng)補(bǔ)體價(jià)、溶菌系統(tǒng)補(bǔ)體價(jià)等,測(cè)定其活性以確定用量。
應(yīng)用
補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)是診斷人、畜傳染病常用的血清學(xué)診斷方法之一。本法不僅可用于診斷傳染病,如鼻疽、牛肺疫、馬傳染性貧血、乙型腦炎、布氏桿菌病、鉤端螺旋體病、血錐蟲病等,也可用于鑒定病原體,如對(duì)馬流行性乙型腦炎病毒的鑒定和口蹄疫病毒的定型等。