供免疫用的動(dòng)物主要是哺乳動(dòng)物和禽類,常選擇家兔、綿羊、山羊、馬、騾和豚鼠及小鼠等。動(dòng)物的選擇常根據(jù)抗體的用途和量來(lái)決定,也與抗原的性質(zhì)有關(guān)。如要獲得大量的抗體,多采用大動(dòng)物;如要是獲得直接標(biāo)記診斷的抗體,則直接采用本動(dòng)物;如要獲得間接的標(biāo)記診斷用抗體,則必須用異源動(dòng)物制備抗體;如果難以獲得的抗原,且抗體的需要量少,則可以采用純系小鼠制備;一般實(shí)驗(yàn)室采用的抗體,多用兔和羊制備。
免疫用的動(dòng)物最好選擇適齡的健康雄性動(dòng)物,雌性動(dòng)物特別是妊娠動(dòng)物用于制備免疫抗體則非常不合適,有時(shí)甚至不產(chǎn)生抗體。由于對(duì)免疫應(yīng)答的個(gè)別差異,免疫時(shí)應(yīng)同時(shí)選用數(shù)只動(dòng)物進(jìn)行免疫。
抗原是多種多樣的,而且千差萬(wàn)別。就其化學(xué)成分而言,有蛋白質(zhì)抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言,有完全抗原和不完全抗原。為了獲得較好的抗血清,最好是選用蛋白質(zhì)抗原,如要制備用于篩選細(xì)菌表達(dá)的cDNA文庫(kù)或免疫印跡的抗血清,最好選用可降解的蛋白質(zhì)抗原。不同的抗原,其免疫原性的強(qiáng)弱均不相同,這種免疫原性的強(qiáng)弱取決于抗原的分子量、化學(xué)活性基團(tuán)、立體結(jié)構(gòu)、物理形狀和彌散速度等。
抗原的免疫劑量是依照給予動(dòng)物的種類、免疫周期以及所要求的抗體特性等不同而不同。劑量過(guò)低,不能引起足夠強(qiáng)的免疫刺激,免疫劑量過(guò)多,有可能引起免疫耐受。在一定的范圍內(nèi),抗體的效價(jià)是隨注射劑量的增加而增高。蛋白質(zhì)抗原的免疫劑量比多糖類抗原寬。一般而言,小鼠的首次免疫劑量為50μg~400μg/次,大鼠為100μg~1 000μg/次,兔為200μg~1 000μg/次。加強(qiáng)計(jì)量為首次劑量的1/5~2/5。
免疫劑量與注射途徑有關(guān),一般而言,靜脈注射劑量大于皮下注射,而皮下注射又比掌內(nèi)和跖內(nèi)皮下注射劑量大,也可采用淋巴結(jié)內(nèi)注射法。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小,對(duì)家兔而言,采用弗氏完全佐劑,則需注射0.5mg~1mg/kg./次,如采用弗氏不完全佐劑則注射劑量應(yīng)大10倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法。如需要獲得高效價(jià)的抗血清,宜采用大劑量長(zhǎng)程免疫法。免疫周期長(zhǎng)者,可少量多次。免疫周期短者,應(yīng)大量少次。
兩次注射的間隔時(shí)間應(yīng)長(zhǎng)短適宜,太短起不到再次反應(yīng)的效果,太長(zhǎng)則失去了前一次激發(fā)的敏感作用。一般間隔時(shí)間應(yīng)為5~7天,加佐劑者應(yīng)為2周左右。
注射的Ig純度高,則一般不易引起過(guò)敏反應(yīng),如注射血清,即使是少量,在再次免疫時(shí),極易引起過(guò)敏反應(yīng),所以一定要采取措施。