質(zhì)粒提取過(guò)程參照E.Z.N.A Plasmid Extraction Kit進(jìn)行。
（1） 用無(wú)菌牙簽挑取平板上白色單菌落(5~10個(gè))分別接種至3-5ml LB培養(yǎng)液(Amp )中,200rpm培養(yǎng)14~16小時(shí)；
（2） 室溫下，10,000g離心1分鐘收菌；
（3） 加入溶液I 250μl，渦旋重懸菌體；
（4） 加入溶液II 250μl，溫和倒轉(zhuǎn)4~6次混勻，室溫放置2分鐘
（5） 加入350μl溶液III，溫和倒轉(zhuǎn)至有白色絮狀沉淀產(chǎn)生， 室溫下，10,000g離心10分鐘；
（6） 轉(zhuǎn)移上清液于分離柱中，室溫下，10,000g離心1分鐘；
（7） 倒棄流出液，加入500μl HB Buffer，室溫下，10,000g離心1分鐘
（8） 倒棄流出液，加入750μl Wash Buffer，室溫下，10,000g離心1分鐘，倒棄流出液，重復(fù)此步驟一次；
（9） 室溫下，10,000g離心1分鐘，以去除分離柱中殘余的乙醇
（10） 將分離柱重新放入一個(gè)干凈的1.5ml離心管中，加入30~50μl滅菌水，靜置3-5分鐘，定溫下，10,000g離心1分鐘以洗出質(zhì)粒DNA，-20℃保存。