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1．判斷儀器脫氣機(jī)是否正常：打開purge閥，流速設(shè)為2ml/min，然后提起過濾頭，讓體系進(jìn)一些空氣，再放下過濾頭，看氣泡是否會減少來判斷脫氣機(jī)是否起作用；
2．溶劑過濾頭不可超聲清洗，可用35%硝酸浸泡1小時后再用溶劑清洗；
3．EDTA、乙二胺四乙酸等會對液相柱的不朽鋼產(chǎn)生腐蝕；四氯化碳與2-異丙醇、四氫呋喃不可混合使用，但可單獨使用；
4．溶劑的使用：每兩天更換或重新過濾溶劑（尤其是水，需要每天更換）；流動相過濾是為了去除微生物，一般水要放在棕色瓶中；
5．判斷purge閥的濾芯是否需更換：用水作流動相時，流速為5ml/min時，正常泵壓應(yīng)為0bar（若打開purge閥時，泵壓超過10bar時需更換濾芯）；
6．若用非極性溶劑作流動相，則需更換泵中起密封作用的“黑草帽”（適合反相的材料為石墨+聚四氟乙烯，而適合正相的為 ），而且必須一對同時更換，否則損壞更快；
7．密封墊的沖洗：當(dāng)流動相中鹽的濃度大于0.01M時，可減少密封墊的磨損；用1%異丙醇溶液沖洗活塞桿中析出的鹽（加異丙醇是為了防止細(xì)菌生長），流速設(shè)為3-5滴/min；泵開著，洗鹽裝置也須開著；
8．泵頭不可用超聲清洗（可用乙醇、水清洗）、寶石桿不可超聲，石英窗可用超聲清洗；
9．緩沖鹽的通道放在比例閥的下面，只有兩相的話，只用一邊（鹽在下面，有機(jī)相在上面）；
10．雙元泵為泵后混合方式（為高壓混合方式，不易進(jìn)氣泡），而四元泵為低壓混合方式；
11．出口球型閥（outlet ball valve）可用超聲清洗；
12．雙元泵有一個篩網(wǎng)（sieve）可控制低流速；
13．流動相使用了緩沖鹽，則必為反相柱（不可長時間用水沖），一般可沖20-30min，然后加入有機(jī)相（如甲醇），濃度逐步加大，直至100%甲醇；
14．反相和正相轉(zhuǎn)換時，一般要做溶劑過渡（最佳為異丙醇），因為粘度大，流速不可設(shè)太大，不要超過1ml/min（完全置換原來溶劑所需溶劑體積=體系體積（柱體積+1.5ml）×5）；
15．比例閥內(nèi)漏：抬起有嫌疑的通路，看管內(nèi)流動相體積是否減少（抬起時同時打開purge閥）；
16．泵壓力不正�？赡茉颍簹馀�、主動閥故障、出口閥故障、密封墊或柱塞桿磨損，滲漏或堵塞、比例閥故障、傳感器故障、使用比例閥混合時鹽濃度太高；
17．自動進(jìn)樣：旁路狀態(tài)、主路狀態(tài)；手動進(jìn)樣：load狀態(tài)至inject狀態(tài)（最好滿刻度進(jìn)樣，建議吸3倍以上進(jìn)樣體積），小體積進(jìn)樣則以小于1/2進(jìn)樣閥體積為佳；平時進(jìn)樣閥最好保持在inject狀態(tài)（最右邊狀態(tài)）；
18．進(jìn)樣流程：插針——inject狀態(tài)——load狀態(tài)——進(jìn)樣（緩慢）——inject狀態(tài)——拔出針（進(jìn)樣閥后有兩根廢液管）；
19．VWD（可變波長）檢測器：檢測器后out廢液管不可太短，否則流通池容易進(jìn)氣泡，也不可太長，否則易壓碎流通池；
20．DAD檢測器（優(yōu)勢為優(yōu)化條件方便）：最大波長選擇——要選擇溶劑沒有吸收的位置（避開約20nm）；VWD檢測器的靈敏度略高于DAD檢測器；濾光片中鈥玻璃用于校準(zhǔn)波長；若要檢測器的靈敏度提高則要開大狹縫（二極管陣列前狹縫默認(rèn)為4nm）；
21．DAD檢測器的氘燈可用于VWD檢測器，但反之則不行；鎢燈、氙燈壽命長，可隨開隨用，但“氘燈需要預(yù)熱（10幾分鐘）（壽命為1000小時），1-2小時不用，不用關(guān)，還是開著更好，氘燈放時間長容易衰變”，燈可進(jìn)行測試；
22．測定條件設(shè)定：reference wave（流動相中溶劑的吸收）可以不設(shè)，梯度洗脫時參考波長要設(shè)，否則會導(dǎo)致基線漂移，DAD可選一個樣品沒吸收的波長作為參考光；band width（VWD設(shè)為光譜的半譜帶寬度，而DAD檢測器則不用設(shè)）（此范圍內(nèi)作色譜圖可降低噪音，信噪比更好，但信號會降低）；參考波長選擇原則：樣品沒有吸收，但靠近樣品最大吸收的位置；參考光波長帶寬必須大于或等于測量光波長帶寬；DAD選條件時要存所有光譜圖（spectrum）；氘燈（190-800nm），但有效范圍為190-600nm，鎢燈（470-950nm），若用470-800nm時兩燈同開則強(qiáng)度加大；
23．基線噪音大原因：泵壓不穩(wěn)、有氣泡、柱污染；
24．清洗在線脫氣機(jī)及比例閥（尤其是長期使用水相或緩沖鹽的通路）：先用水沖洗，再用甲醇沖洗，可以打開purge閥，使用5ml/min的流速，也可用IPA清洗：A、Buffer B、MeoH C、Water D、CH3CN 分析：A:B:D=20:
25．流動相大于9.5或小于2.3時，進(jìn)樣閥應(yīng)更換tefzel轉(zhuǎn)子密封，可耐受壓：VWD(40bar)，MWD(120bar), FLD(20bar), RID(56bar)；RID,FLD永遠(yuǎn)是最后一個檢測器；
