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    單相瓊脂擴(kuò)散試驗

    放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-07-12  來源:實驗室資訊網(wǎng)
    核心提示:原理一種定量試驗,將一定量的抗體混合于瓊脂內(nèi),傾注于玻片上,凝固后,在瓊脂層上打孔,再將抗原加入孔中,使其向四周擴(kuò)散。抗
    原理
    一種定量試驗,將一定量的抗體混合于瓊脂內(nèi),傾注于玻片上,凝固后,在瓊脂層上打孔,再將抗原加入孔中,使其向四周擴(kuò)散。抗原抗體復(fù)合物形成的沉淀環(huán)直徑與抗原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原制成標(biāo)準(zhǔn)曲線,則未知標(biāo)本中的抗原含量即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出。本試驗主要用于檢查標(biāo)本中各種免疫球蛋白和血清IgG含量。
     
    材料 
    1.抗體:羊抗人IgG單價抗血清。
    2.抗原:待檢血清。
    3.3%生理鹽水瓊脂、生理鹽水、載玻片、直徑3mm打孔器、小三角燒瓶、毛細(xì)滴管、濕盒。
     
    方法 
    1、制備含抗體的瓊脂板
    取羊抗人IgG單價抗血清一瓶(效價1:80),量取0.3ml于一小三角燒瓶中,加生理鹽水11.7ml(40倍稀釋混勻,置56℃水浴 中恒溫2~3分鐘)。
    取3%生理鹽水瓊脂一管,隔水加熱使溶,然后置56℃水浴 中,待瓊脂溫度降至56℃時,立即加入等量1:40稀釋抗血清,迅速輕輕混勻,勿使產(chǎn)生氣泡,迅速傾入載玻片上,每片3.5ml,待凝固后打孔。如下圖所示。
      
    2、稀釋待檢血清
    將待檢血清用生理鹽水作40倍稀釋,
    3、打孔、加樣
    每份檢樣加兩孔,加滿(但不要溢出),加樣時毛細(xì)滴管尖端不要劃破瓊脂。
    4、溫育
    將瓊脂板置搪瓷盒,墊濕紗布或海綿以防干燥,37℃恒溫箱 24h。
     
    結(jié)果觀察與分析 
    測量并求出每份檢樣兩孔的沉淀環(huán)平均直徑,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線求出IgG含量。
    編輯:songjiajie2010

     
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    關(guān)鍵詞: 單相瓊脂擴(kuò)散
     

     
     
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