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羥乙基淀粉（Hyroxyethyl Starch, HES）是一種非離子型淀粉改性產(chǎn)物。目前，被認(rèn)為是最為良好的血漿代用品，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域常作為失血性休克的治療和血液的稀釋劑等以維持血液膠體滲透壓作用。因其獨(dú)有的特性及功能，近年來(lái)，羥乙基淀粉再次成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。
HES的分子量及分子量的分布無(wú)疑是各企業(yè)及檢測(cè)機(jī)構(gòu)評(píng)價(jià)產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)劣環(huán)節(jié)中較為重要的指標(biāo)。而關(guān)于多大分子量范圍的HES用于血漿代用品更為合適；何種檢測(cè)手段測(cè)定其分子量及分子量的分布更為準(zhǔn)確，更為可信，更符合工業(yè)快速檢測(cè)要求等問(wèn)題曾引起廣泛討論與研究。
凝膠滲透色譜法（Gel Permeation Chromatography, GPC），又稱為體積排阻法（Size Exclusion Chromatography, SEC），其基本原理是利用樣品分子中含有的不同顆粒大小的分子依次經(jīng)過(guò)，具有多孔徑的凝膠色譜填料顆粒（填料顆�？變�(nèi)部/填料顆粒之間間隙），致使其不同大小顆粒流經(jīng)的實(shí)際路程不同而依次按從大到小的順序洗脫出來(lái)。因此，曾廣泛用于高分子分子量及分布的測(cè)定。然而，該方法需要標(biāo)準(zhǔn)物事先標(biāo)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，且該標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確性在很大程度上依賴于標(biāo)準(zhǔn)物與未知樣品結(jié)構(gòu)及性質(zhì)的相似性。因此，該方法誤差較大（約10%），如果用于HES的分子量及分子量分布的測(cè)定，將很可能得不到精確可靠的數(shù)據(jù)，其質(zhì)量將得不到強(qiáng)有力的保障。
而光散射法與GPC聯(lián)用技術(shù)的出現(xiàn)，迅速取代了凝膠滲透色譜法在該領(lǐng)域的應(yīng)用。鑒于該技術(shù)不需要標(biāo)樣事先繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測(cè)試的結(jié)果的準(zhǔn)確性又完全不依賴于未知樣品與標(biāo)樣結(jié)構(gòu)及性質(zhì)的相似性，因此，該技術(shù)被認(rèn)為是高分子物質(zhì)分子量的絕對(duì)表征方法。
本文簡(jiǎn)述了利用光散射法與GPC聯(lián)用技術(shù)測(cè)定HES分子量及其分布，確定了10%大分子部分以及10%小分子部分分子量等參數(shù)。
1. 原材料及試劑
超純水：miniQ純水儀制備；醋酸及醋酸鹽：國(guó)藥集團(tuán)；羥乙基淀粉溶液（130/0.4）：5mg/ml；
2. 儀器及試驗(yàn)條件
多角度激光光散射儀（DAWN HELEOS II，Wyatt Technology Inc., Santa Barbara, CA）: 激光波長(zhǎng)658nm；光源GaAs。
示差折光檢測(cè)器：（Optilab rEX，Wyatt Technology Inc., Santa Barbara, CA）
凝膠柱：Shodex 804
定量環(huán)：50ul
3. 測(cè)試結(jié)果與分析
3.1 羥乙基淀粉折射率增量的測(cè)定
折射率增量，即溶液折射率隨溶質(zhì)濃度的變化量，該值是計(jì)算分子量的重要參數(shù)之一。本試驗(yàn)采用稱重稀釋法，將配制的HES母液稀釋稱成8個(gè)濃度梯度；依次進(jìn)樣至Optilab rEX示差檢測(cè)器，測(cè)定其折射率增量（dn/dc），結(jié)果為：0.1352±0.0007mL/g，R2 = 0.999797。
3.2 羥乙基淀粉分子量及分布的測(cè)定
如圖2所示，羥乙基淀粉的GPC洗脫圖；該峰值分布較寬，其分散度（Mw/Mn）為2.735，重均分子量（Mw）為1.295×105 kDa；與理論值1.30×105 kDa之間的誤差小于5%。
3.3 羥乙基淀粉中10%小分子部分以及10%大分子部分分子量測(cè)定
如圖3，羥乙基淀粉分子量的累計(jì)分布及微分分布圖。圖中1處顯示的是羥乙基淀粉中10%小分子部份，對(duì)應(yīng)的分子量（Mw）：1.0345×105 kDa；圖中2處顯示的是羥乙基淀粉中10%大分子部份，對(duì)應(yīng)的分子量（Mw）：3.8987×105 kDa。即該樣品中80%的羥乙基淀粉分子量在1.0345×105 ~ 3.8987×105 kDa范圍內(nèi)。
4. 結(jié)論
本試驗(yàn)利用光散射法與GPC聯(lián)用技術(shù)測(cè)定HES分子量及其分布，并確定了10%小分子部分以及10%大分子部分分子量等參數(shù)。該方法簡(jiǎn)單，快速，準(zhǔn)確。操作流程易于程序化，規(guī)范化。適合作為羥乙基淀粉檢測(cè)的常規(guī)方法。
