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    埃希氏大腸菌及檢驗(yàn)

    放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-05-11
    核心提示: 一、定義:  大腸埃希氏菌更習(xí)慣稱為大腸桿菌,分類于腸桿菌科,歸屬于埃希氏菌屬,并且大腸桿菌株ATCC 11775是

     

    一、定義:

      大腸埃希氏菌更習(xí)慣稱為大腸桿菌,分類于腸桿菌科,歸屬于埃希氏菌屬,并且大腸桿菌株ATCC 11775是該屬的模式菌種。大腸桿菌的不同菌株間DNA相關(guān)性為80%,而與同科的志賀氏菌屬(除鮑氏志賀氏菌外)的DNA相關(guān)性可達(dá)80-87%。與人類疾病有關(guān)的大腸桿菌,統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌(此名稱不易與致病性大腸桿菌相混淆),一般包括五種:即腸毒素性大腸桿菌(ETEC)、致病性大腸桿菌(EPEC)、出血性大腸桿菌(EHEC)、侵襲性大腸桿菌(EIEC)和粘附性大腸桿菌(EAEC)。文獻(xiàn)報(bào)道還有幾種,象:凝集性大腸桿菌、即產(chǎn)VT毒素又具有侵襲性的大腸桿菌等,但目前尚未達(dá)成統(tǒng)一共識(shí)。

    二、生物學(xué)特性:

    基本形態(tài)特征:

      此菌為兩端鈍圓的短小桿菌,一般大小約0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生長(zhǎng)條件不同,個(gè)別菌體可呈近似球狀或長(zhǎng)絲狀。此菌多單獨(dú)存在或成雙,但不呈長(zhǎng)鏈狀排列。約有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能運(yùn)動(dòng),但多數(shù)菌體只有1-4根,一般不超過10根,故菌體動(dòng)力弱;多數(shù)菌株生長(zhǎng)有比鞭毛細(xì)、短、直且數(shù)量多的菌毛,有的菌株具有莢膜或微莢膜;不形成芽胞,對(duì)普通堿性染料著色良好,革蘭氏染色陰性。

    培養(yǎng)特征:

      由于此菌合成代謝能力強(qiáng),在含無(wú)機(jī)鹽、胺鹽、葡萄糖的普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。最適生長(zhǎng)溫度為37℃,在42-44℃條件下仍能生長(zhǎng),生長(zhǎng)溫度范圍為15-46℃。在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)表現(xiàn)3種菌落形態(tài):(1)光滑型: 菌落邊緣整齊,表面有光澤、濕潤(rùn)、光滑、呈灰色,在生理鹽水中容易分散。(2)粗糙型:菌落扁平、干澀、邊緣不整齊,易在生理鹽水中自凝。(3)粘液型:常為含有莢膜的菌株。此菌兼性厭氧,在有氧條件下生長(zhǎng)良好,最適生長(zhǎng)pH為6.8-8.0,所用培養(yǎng)基pH為7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0則生長(zhǎng)緩慢。

    生化反應(yīng)與血清學(xué)反應(yīng)

      大腸桿菌屬于衛(wèi)生學(xué)意義的大腸菌群和糞大腸菌群的范疇,因此,必須符合大腸菌群和糞大腸菌群的有關(guān)定義,在檢測(cè)大腸菌群、糞大腸菌群的基礎(chǔ)上,可以應(yīng)用I(吲哚)、M(甲基紅)、Vi(3羥基-2-丁酮)、C(檸檬酸)即IMViC生化試驗(yàn)對(duì)大腸桿菌作進(jìn)一步鑒定,其IMViC結(jié)果為++--或-+--。生化反應(yīng)是鑒定大腸桿菌的主要方法之一,然而,大腸桿菌之間生化反應(yīng)的差異非常常見,象:許多菌種非/遲發(fā)酵乳糖,但并不說明它們遺傳上有明顯不同,生化反應(yīng)非典型的大腸桿菌菌株與典型菌株的DNA相關(guān)性在85%-100%。附表1為大腸桿菌生化反應(yīng)特性表。其中H2S、脲酶、阿糖酸、吲哚、ONPG試驗(yàn)常為首選生化反應(yīng),其余為進(jìn)一步的生化試驗(yàn)。大腸桿菌在賴氨酸脫羧酶、粘質(zhì)酸鹽、醋酸鹽生化試驗(yàn)中,有一項(xiàng)或多項(xiàng)試驗(yàn)陽(yáng)性,且厭氧性生長(zhǎng)弱,有動(dòng)力和吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性可與志賀氏菌相鑒別。

      大腸桿菌的血清學(xué)反應(yīng),往往是對(duì)經(jīng)分離、鑒定、確證為大腸桿菌的 進(jìn)一步分型,常不作為常規(guī)方法使用。附表2所列主要致瀉性大腸桿菌的血清型。對(duì)大腸桿菌的分型鑒定工作,基層檢驗(yàn)單位若有要求時(shí),可與各地所屬出入境檢驗(yàn)檢疫局實(shí)驗(yàn)室聯(lián)系,委托進(jìn)行血清學(xué)鑒定工作。

    三、大腸桿菌的抵抗力:

      此菌對(duì)理化因素的抵抗力,在無(wú)芽胞菌中是最強(qiáng)的一種,在室溫可存活數(shù)周,在土壤、水中存活數(shù)月,耐寒力強(qiáng),但是在30分鐘內(nèi)快速冷凍,將37℃降至4℃的過程,可殺死此菌。加熱60℃,30分鐘,此菌可滅活。對(duì)漂白粉,酚、甲醛等較敏感,水中1ppb氯可殺死此菌。此菌耐膽鹽,在一定程度上能抵抗煌綠等染料的抑菌作用,在選擇性培養(yǎng)基配制上,常利用此菌這一性質(zhì)。

    四、衛(wèi)生學(xué)意義與流行學(xué)

      由于大腸桿菌是人及各種動(dòng)物腸道中的正常寄居菌,常隨糞便從人及動(dòng)物體排出,廣泛散播于自然界,所以一旦檢出大腸桿菌,即意味著直接或間接地被糞便污染,而在衛(wèi)生學(xué)上被用于飲水,牛奶或食品等的糞源性污染衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)指標(biāo);并且由于大腸桿菌在外界存活時(shí)間與一些主要腸道病原菌相近,它的出現(xiàn)也可能預(yù)示著某些腸道病原菌(例:沙門氏菌、志賀氏菌)的存在,因此該細(xì)菌是國(guó)際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)指示菌。近來,有些國(guó)家在執(zhí)行HACCP管理中,將大腸桿菌檢測(cè)作為微生物污染狀況的監(jiān)測(cè)指標(biāo)和HACCP實(shí)施效果的評(píng)估指標(biāo)。

      致瀉性大腸桿菌是引起人體以腹瀉癥狀為主的全球性疾病,其中尤以EPEC、ETEC所占比例為大。附表3是我國(guó)部分省市主要腹瀉病原體檢出率情況,盡管目前報(bào)道各地主要腹瀉病是由志賀氏菌或輪狀病毒引起的,但是,多年來,致瀉性大腸桿菌引起的腹瀉病例始終位于第二位,可見大腸桿菌腸道傳染的廣泛性。還有,致瀉性大腸桿菌亦可常年引發(fā)人體腹瀉,以夏秋季為高峰,在患者感染住院率中,嬰幼兒占60%以上。近來,EHEC O157:H7為世界衛(wèi)生組織(WHO)定為新的食源性致病菌,其引發(fā)的出血性腸炎的暴發(fā)或散發(fā)病例,自1983年以來在北美州(美國(guó)、加拿大)地區(qū)逐年增多,英國(guó)、日本亦有爆發(fā)和散發(fā)病例報(bào)道,我國(guó)也發(fā)現(xiàn)散發(fā)病例,尚未有爆發(fā)EHEC的報(bào)道。附表4為近幾年EHEC的污染狀況。

     

    五、大腸桿菌檢驗(yàn)程序圖解:

    檢 樣

    LST肉湯

    ↓37℃,48h

     

    LST肉湯管陽(yáng)性 (疑似大腸菌群)

     

    ↓37℃,48h       |  

    EC肉湯        BGLB肉湯管陽(yáng)性 (證實(shí)大腸菌群)

     

    ↓44℃,24h   按BGLB肉湯產(chǎn)氣管數(shù),查MPN表,報(bào)告大腸菌群MPN/g

    EC肉湯產(chǎn)氣管為陽(yáng)性(糞大腸菌群)

     

    查MPN表,報(bào)告糞大腸菌群MPN/g

     

    陽(yáng)性管再培養(yǎng)24h

    EMB平板分離

    ↓ 37℃,24h

     


    黑色菌落移種營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面

     

     

    LST肉湯    IMViC生化試驗(yàn)     革蘭氏染色

     

    產(chǎn)酸產(chǎn)氣    ++--/-+--      無(wú)芽胞G-桿菌

    -----------------------

     

     

     

     

     

     

    大腸桿菌

    按EC肉湯產(chǎn)氣管數(shù),查MPN表,報(bào)告大腸桿菌MPN/g

     

    說明:

    1、由于大部分致瀉性大腸桿菌在6℃條件中可失去活力,故大腸桿菌的定性檢測(cè)比定量檢測(cè)更適宜。如果確有大腸桿菌定量檢測(cè)要求的話,可用MPN法或終點(diǎn)稀釋法進(jìn)行。

    2、基層單位如有大腸桿菌生化鑒定要求或大腸桿菌血清學(xué)分型要求,可委托屬地出入境檢驗(yàn)檢疫局進(jìn)行檢驗(yàn)。

    3、檢測(cè)大腸桿菌的MUG法和膜過濾法,可參閱有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)說明進(jìn)行。

    4、國(guó)標(biāo)法與FDA方法,在所用培養(yǎng)基、檢驗(yàn)程序上略有差異,但不影響大腸桿菌檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本章介紹的方法,可詳見SN 0169-92標(biāo)準(zhǔn)。

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