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    分光光度計使用ABC

    放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2020-11-04  來源:食品微生物檢驗公眾號
    核心提示:分光光度計是實驗室常用設(shè)備之一,在食品、制藥、環(huán)境、生命科學(xué)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。所以實驗室的小伙伴熟悉并掌握其如何使用
     分光光度計是實驗室常用設(shè)備之一,在食品、制藥、環(huán)境、生命科學(xué)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。所以實驗室的小伙伴熟悉并掌握其如何使用時非常必要,而且簡單的故障維修和維護也要有所了解。今天小編把分光光度計使用中的那些事進行了總結(jié),希望能對你有所幫助。


    分光光度計是用不連續(xù)的波長采樣反射物體或透射物體的一種測量儀器。由于不同物體分子的結(jié)構(gòu)不同,對不同波長光線的吸收能力也不同,因此,每種物體都具有特定的吸收光譜。能從含有各種波長的混合光中,將每一種單色光分離出來,并測量其強度的儀器叫做分光光度計。

    分光光度法是比色法的發(fā)展。比色法只限于在可見光區(qū),分光光度法則可以擴展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。分光光度法則要求近于真正單色光,其光譜帶寬最大不超過3-5nm,在紫外區(qū)可到1nm以下,來自棱鏡或光柵,具有較高的精度。

    分光光度計?就是利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器。分光光度計可分為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。

    項目對分析結(jié)果的影響

    1、波長準(zhǔn)確度
    分光光度法原理要求照射在樣品池上的單色光必須對應(yīng)于樣品吸收光譜中的某一個吸收峰的波長。由于儀器的制造和調(diào)整誤差,單色光的實際波長與儀器的波長讀數(shù)值間都存在一定的誤差。樣品中絕大部分的主要吸收峰都有一定的寬度,對波長準(zhǔn)確度要求允許寬些。但是,當(dāng)吸收峰寬度較小,而且吸收峰兩側(cè)邊緣比較陡直,此時波長準(zhǔn)確度的影響就必須引起注意。


    2、透射比(吸光度)準(zhǔn)確度
    很顯然,透射比或吸光度的誤差越大,測試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。


    3、雜散光
    雜散光是由于光學(xué)元件制造誤差以及光學(xué)和機械零件表面的漫反射形成的。雜散光是分析樣品的非吸收光,隨著樣品濃度的增加,雜散光的影響也隨之增大,將給分析結(jié)果帶來一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強度和檢測器的靈敏度均明顯減弱,雜散光的影響更不能忽視。因此,雜散光的大小也是儀器性能的一項重要指標(biāo)。

    使用與維護

    1、若大幅度改變測試波長,需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。

    2、指針式儀器在未接通電源時,電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進行機械調(diào)零。

    3、比色皿使用完畢后,請立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。

    4、操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈,以免影響光效率。

    5、WFZ800-DA、756型等分光光度計,由于其光電接收裝置為光電倍增管,它本身的特點是放大倍數(shù)大,因而可以用于檢測微弱光電信號,而不能用來檢測強光。否則容易產(chǎn)生信號漂移,靈敏度下降。針對其上述特點,在維修、使用此類儀器時應(yīng)注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下,因此在預(yù)熱時,應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿,避免長時間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。

    6、放大器靈敏度換擋后,必須重新調(diào)零。

    7、比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用,否則將使測試結(jié)果失去意義。在進行每次測試前均應(yīng)進行比較。


    具體方法如下:分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液,把儀器置于某一波長處,石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水,玻璃比色杯:700nm處裝蒸餾水,將某一個池的透射比值調(diào)至100%,測量其他各池的透射比值,記錄其示值之差及通光方向,如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用,若超出此范圍應(yīng)考慮其對測試結(jié)果的影響。

    典型故障及其排除方法

    1、儀器不能調(diào)零?赡茉颍

    a.光門不能完全關(guān)閉。解決方法:修復(fù)光門部件,使其完全關(guān)閉。

    b.透過率“100%”旋到底了。解決方法:重新調(diào)整“100%”旋鈕。 

    c.儀器嚴重受潮。解決方法:可打開光電管暗盒,用電吹風(fēng)吹上一會兒使其干燥,并更換干燥劑。

    d.電路故障。解決方法:檢修電路。


    2、儀器不能調(diào)“100%”?赡茉颍
    a.光能量不夠。解決方法:增加靈敏度倍率檔位,或更換光源燈(盡管燈還亮)。

    b.比色皿架未落位。解決方法:調(diào)整比色皿架使其落位。

    c.光電轉(zhuǎn)換部分老化。解決方法:更換部件。

    d.電路故障。解決方法:調(diào)修電路。


    3、測量過程中,“100%”點經(jīng)常變動。可能原因:
    a.比色皿在比色皿架中放置的位置不一致,或其表面有液滴。解決方法:用擦鏡紙擦干凈比色皿表面,然后將其安放在比色槽的左邊,上面用定位夾定位。

    b.電路故障(電壓、光電接收、放大電路)。解決方法:送修。


    4、數(shù)顯不穩(wěn)?赡茉颍
    a.預(yù)熱時間不夠。解決方法:延長預(yù)熱時間至30分鐘左右(部分儀器由于老化等原因,長時間處于工作狀態(tài)時,也會工作不穩(wěn))。

    b.光電管內(nèi)的干燥劑失效,使微電流放大器受潮。解決方法:烘烤電路,并更換或烘烤干燥劑。

    c.環(huán)境振動過大、光源附近空氣流速大、外界強光照射等。解決方法:改善工作環(huán)境。

    d.光電管、電路等其它原因。

    小結(jié)

    綜上所述,以下幾個問題應(yīng)引起儀器操作人員注意:

    1、比色皿架及比色皿在使用中的正確到位問題。

    有些使用者對這個問題不夠重視,因操作不當(dāng)造成偶然誤差,嚴重影響分析結(jié)果。

    首先,應(yīng)保證比色皿不傾斜放置。稍許傾斜,就會使參比樣品與待測樣品的吸收光徑長度不一致,還可能使入射光不能全部通過樣品池,導(dǎo)致測試比準(zhǔn)確度不符合要求。

    其次,應(yīng)保證每次測試時,比色皿架推拉到位。若不到位,將影響到測試值的重復(fù)性或準(zhǔn)確度。最后,還應(yīng)保證比色皿的清潔度,延長其使用壽命。


    2、干燥劑的使用問題。干燥劑失效將導(dǎo)致:

    a.數(shù)顯不穩(wěn)、無法調(diào)“0”點或“100%”點(電路或光電管受潮)。

    b.反射鏡發(fā)霉或沾污,影響光效率、雜散光增加。鑒于上述原因,分光光度計的放置地點應(yīng)遠離水池等濕度大的地方、干燥劑應(yīng)定期更換或烘烤。

     

    3、儀器的工作環(huán)境

    應(yīng)避免陽光直射、避免強電場、避免與較大功率的電器設(shè)備共電、避開腐蝕性氣體等。

    編輯:songjiajie2010

     
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