血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。血清在細(xì)胞培養(yǎng)中提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的生長(zhǎng)因子、激素、各種蛋白、促進(jìn)貼壁和鋪展的因子、細(xì)胞傳代時(shí)蛋白酶抑制劑和其他多種不明營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),以胎牛血清(FBS)的使用最為普遍,其他血清類型還包括小牛血清、成牛血清、馬血清、羊血清、雞血清、兔血清等,其營(yíng)養(yǎng)類型有很大差異,適用于不同類型細(xì)胞。
血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,具有極為重要的功能:
1、提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
2、提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3、有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
4、是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。
5、起酸堿度緩沖液作用。
6、提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
血清最大的劣勢(shì)就是不穩(wěn)定,不穩(wěn)定原因如下:
1、來(lái)源不穩(wěn)定
以胎牛血清為例,懷孕母牛在屠宰前腹部被剖開,取出胎牛,在低溫?zé)o菌條件下,刺破胎牛的心臟以獲取血清。就這一條,動(dòng)物倫理組織就可以把你攔住嘮嘮。另外,牛血清必須來(lái)自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家,我國(guó)在對(duì)牛血清的質(zhì)量《中國(guó)生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 2000》中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求,包括蛋白質(zhì)含量,細(xì)菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)毒素,細(xì)胞增殖支持等檢查。
2、組分不穩(wěn)定
還有最讓人鬧心的,動(dòng)物血清成分復(fù)雜,其組分及含量常和動(dòng)物性別(公胎牛,母胎牛,如激素)、年齡、生理狀態(tài)、營(yíng)養(yǎng)條件不同而有差異,是不是覺得特像中藥。還有,盡管血清大部分成分是已知的,但仍然存在不清楚的組分,所以導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)化極其困難。所以,師兄師姐經(jīng)常會(huì)告訴你說(shuō),不同生產(chǎn)廠家的血清差異很大,就是同一廠家生產(chǎn)的不同批次血清差異也很大。
3、用法不穩(wěn)定
實(shí)驗(yàn)習(xí)慣的不同,都可能導(dǎo)致細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定,比如,有人四度過(guò)夜融化,有人急性子,直接扔進(jìn)水浴鍋。新手拿到一瓶血清,第一個(gè)問題就是問自己,要不要滅活?還有,別忘了,血清同時(shí)含有內(nèi)毒素、血色素、補(bǔ)體、抗體等其他有害成分,影響細(xì)胞生長(zhǎng)甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡,對(duì)某些實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō),極為重要。
如此的不穩(wěn)定,該怎么在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中盡可能的解決呢?
1、土豪和有得選擇的實(shí)驗(yàn)室,請(qǐng)選擇無(wú)血清培養(yǎng)基。
2、不要頻繁更換血清牌子,不同廠家血清來(lái)源,生產(chǎn)工藝,包裝運(yùn)輸?shù)榷加泻艽蟛町,盡量不要更換牌子。
3、選定品牌后,對(duì)于經(jīng)過(guò)測(cè)試過(guò)的好用的血清,同一個(gè)批次多囤積一些,計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)的大概用量,然后在多加20%的儲(chǔ)備,放在-20或-80度保存。
4、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)建議每個(gè)人用自己的培養(yǎng)基,PBS,胰酶等試劑以及用具,保持實(shí)驗(yàn)條件一致性,避免交叉污染,別給自己添堵,也別給別人添堵。
5、如果實(shí)在要更換血清,先將細(xì)胞在新的血清里傳兩到三代,適應(yīng)新的條件后,細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。