細(xì)胞氧化應(yīng)激的定量評(píng)價(jià)方法大致分做三類(lèi)：

1)測(cè)定由活性氧修飾的化合物;

2)測(cè)定活性氧消除系統(tǒng)酶和抗氧化物質(zhì)的量;

3)測(cè)定含有轉(zhuǎn)錄因子的氧化應(yīng)激指示物。

進(jìn)一步尚有：

1)生物體內(nèi)氧化應(yīng)激的程度足以產(chǎn)生應(yīng)答;

2)活體內(nèi)難以蓄積;

3)在活體內(nèi)不是被代謝，而是穩(wěn)定存在，等等。理解這些要點(diǎn)對(duì)于臨床普及推廣都很有用。

細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)操作步驟

終止液是用于測(cè)定細(xì)胞增殖或毒性實(shí)驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無(wú)放射性的比色檢測(cè)法。CCK法應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測(cè)等。下面以BUNSEN的CCK8試劑盒為例，簡(jiǎn)要說(shuō)明細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)的操作步驟

方法/步驟

1.在96孔板中配制100μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí) (在 37℃，5% CO₂ 的條件下)。

2.向培養(yǎng)板加入10μl不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。

3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (例如: 6,12,24或48小時(shí))。

4.向每孔加入10μl CCK8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。

5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。

用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。

如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加10μl 0.1M HCl溶液或者1%wSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化 。