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為了獲得準(zhǔn)確的研究結(jié)果，準(zhǔn)確測得樣品溶液的吸光度非常關(guān)鍵。一般來說，分析結(jié)果的不可靠性與偶然誤差和系統(tǒng)誤差有關(guān)。偶然誤差影響測量的精密度，可通過足夠數(shù)量測量的統(tǒng)計(jì)處理來減少;系統(tǒng)誤差影響測量結(jié)果的準(zhǔn)確度，可在大體相同實(shí)驗(yàn)條件下，用比較一種物質(zhì)的準(zhǔn)確測量結(jié)果，使系統(tǒng)誤差統(tǒng)一起來。
一、紫外分光光度計(jì) -紫外可見分光光度法 紫外分光光度計(jì)：根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計(jì)可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量。
紫外可見分光光度法：紫外-可見分光光度法是在190〜800mn波長范圍內(nèi)測定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法。當(dāng)光穿過被測物質(zhì)溶液時(shí)，物質(zhì)對(duì)光的吸收程度隨光的波長不同而變化。因此，通過測定物質(zhì)在不同波長處的吸光度，并繪制其吸光度與波長的關(guān)系圖即得被測物質(zhì)的吸收光譜。從吸收光譜中，可以確定最大吸收波長和最小吸收波物質(zhì)的吸收光譜具有與其結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征性。因此，可以通過特定波長范圍內(nèi)樣品的光譜與對(duì)照光譜或?qū)φ掌饭庾V的比較，或通過確定最大吸收波長，或通過測量兩個(gè)特定波長處的吸收比值而鑒別物質(zhì)。用于定量時(shí)，在最大吸收波長處測量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對(duì)照溶液的吸光度進(jìn)行比較或采用吸收系數(shù)法求算出樣品溶液的濃度。
二、儀器的校正和檢定 波長：儀器波長的允許誤差為：紫外光區(qū)± lnm , 500nm附近士 2nm。 由于環(huán)境境因素對(duì)機(jī)械部分的影響，儀器的波長經(jīng)常會(huì)略有變動(dòng)，因此除應(yīng)定期對(duì)所用的儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應(yīng)于測定前校正測定波長。常用汞燈中的較強(qiáng)譜線 237. 83nm，253. 65nm，275. 28nm， 296. 73nm，313.16nm，334.15nm， 365. 02nm，404. 66nm， 435. 83nm，546. 07nm 與576. 96nm；或用儀器中氘燈的486. 02nm與656.10nm譜線進(jìn)行校正；鈥玻璃在波長 279. 4nm，287. 5nm， 333. 7nm，360. 9nm，418. 5nm， 460. 0nm， 484. 5nm， 536. 2nm 與 637. 5nm 處有尖銳吸收峰，也可作波長校正用，但因來源不同或隨著時(shí)間的推移會(huì)有微小的變化，使用時(shí)應(yīng)注意；近年來，常使用高氯酸鈥溶液校正雙光束儀器，以10%高氯酸溶液為溶劑，配制含氧化鈥（Ho203 ) 4 % 的溶液，該溶液的吸收峰波長為241. 13nm, 278. l0nm, 287. 18nm，333. 44nm，345.47nm,361, 31nm, 416. 28nm, 451. 30nm，485. 29nm, 536. 64nm和 640.52nm。
吸光度的準(zhǔn)確度：可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在規(guī)定的波長處測定并計(jì)算其吸收系數(shù)，并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較：
其關(guān)系可以用朗伯-比爾定律表述如下： 
式中： A為吸光度； T為透光率； E為吸收系數(shù)，常用的表示方法 ，其物理意義為當(dāng)溶液濃度為1%（g/ml）,液層厚度為1cm時(shí)的吸光度數(shù)值； c為100ml溶液中所含物質(zhì)的重量（按干燥品或無水物計(jì)算），g；
雜散光的檢查：可按下表所列的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長處測定透光率,應(yīng)符合表中的規(guī)定。
三、日常維護(hù)
一、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。他們可以引起機(jī)械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降；造成光學(xué)部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正。應(yīng)具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設(shè)備，特別是地處南方地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室。
二、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。
三、儀器使用一定周期后，內(nèi)部會(huì)積累一定量的塵埃，最好由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對(duì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作，同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對(duì)光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔，必要時(shí)對(duì)光路進(jìn)行校準(zhǔn)，對(duì)機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤滑，最后，恢復(fù)原狀，再進(jìn)行一些必要的檢測、調(diào)校與記錄。
吸光度的準(zhǔn)確度：可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。
二、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。
三、儀器使用一定周期后，內(nèi)部會(huì)積累一定量的塵埃，最好由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對(duì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作，同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對(duì)光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔，必要時(shí)對(duì)光路進(jìn)行校準(zhǔn)，對(duì)機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤滑，最后，恢復(fù)原狀，再進(jìn)行一些必要的檢測、調(diào)校與記錄。
