一、概要
雙酚A(BPA)是生產(chǎn)聚碳酸酯塑料的主要原料之一,而它與乳腺癌、前列腺癌和性早熟有關(guān)。BPA無(wú)處不在,從礦泉水瓶、醫(yī)療器械到及食品包裝的內(nèi)里,都有它的身影。每年,全世界生產(chǎn)2700萬(wàn)噸含有BPA的塑料。但BPA也能導(dǎo)致內(nèi)分泌失調(diào),威脅著胎兒和兒童的健康。癌癥和新陳代謝紊亂導(dǎo)致的肥胖也被認(rèn)為與此有關(guān)。
雙酚A檢測(cè)試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的新一代藥物殘留檢測(cè)產(chǎn)品,與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和靈敏度高等特點(diǎn), 能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度 。
二、試驗(yàn)原理
雙酚A檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物雙酚A與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗雙酚A的抗體,加入酶標(biāo)二抗后,經(jīng)TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含雙酚A的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中的雙酚A含量。
三、適用范圍
可定性、定量檢測(cè)食品包裝袋、塑料瓶等樣本中雙酚A的殘留量。
四、交叉反應(yīng)率
雙酚A ……………………………………… 100%
五、操作步驟:
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板,將不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本:加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50l/孔到對(duì)應(yīng)的微孔中,然后加入雙酚A抗試劑50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板:小心揭開(kāi)蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌工作液250l/孔,充分洗滌4~5次,每次間隔10s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破)。
7、加酶標(biāo)物:加入雙酚A酶標(biāo)物100l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min,取出重復(fù)洗板步驟6。
8、顯色:加入底物液A液50l/孔,再加底物液B液50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15~20min。
9、測(cè)定:加入終止液50l/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測(cè)定每孔OD值。(若無(wú)酶標(biāo)儀,則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定)。
六、檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒靈敏度:0.5ppb
樣本最低檢測(cè)限:5 ppb
回收率:
食品包裝袋…………………………………85±10%
塑料瓶………………………………… 80±10%
精密度:試劑盒的變異系數(shù)均小于10%
七、注意事項(xiàng)
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(20~25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不成線(xiàn)性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;也不要使用過(guò)了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過(guò)了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
6、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
7、在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時(shí)間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到30min。反之,則減短反應(yīng)時(shí)間。
八、貯藏條件及保存期
貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
保存期:該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。
雙酚A(BPA)是生產(chǎn)聚碳酸酯塑料的主要原料之一,而它與乳腺癌、前列腺癌和性早熟有關(guān)。BPA無(wú)處不在,從礦泉水瓶、醫(yī)療器械到及食品包裝的內(nèi)里,都有它的身影。每年,全世界生產(chǎn)2700萬(wàn)噸含有BPA的塑料。但BPA也能導(dǎo)致內(nèi)分泌失調(diào),威脅著胎兒和兒童的健康。癌癥和新陳代謝紊亂導(dǎo)致的肥胖也被認(rèn)為與此有關(guān)。
雙酚A檢測(cè)試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的新一代藥物殘留檢測(cè)產(chǎn)品,與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和靈敏度高等特點(diǎn), 能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度 。
二、試驗(yàn)原理
雙酚A檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物雙酚A與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗雙酚A的抗體,加入酶標(biāo)二抗后,經(jīng)TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含雙酚A的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中的雙酚A含量。
三、適用范圍
可定性、定量檢測(cè)食品包裝袋、塑料瓶等樣本中雙酚A的殘留量。
四、交叉反應(yīng)率
雙酚A ……………………………………… 100%
五、操作步驟:
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板,將不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本:加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50l/孔到對(duì)應(yīng)的微孔中,然后加入雙酚A抗試劑50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板:小心揭開(kāi)蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌工作液250l/孔,充分洗滌4~5次,每次間隔10s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破)。
7、加酶標(biāo)物:加入雙酚A酶標(biāo)物100l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min,取出重復(fù)洗板步驟6。
8、顯色:加入底物液A液50l/孔,再加底物液B液50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15~20min。
9、測(cè)定:加入終止液50l/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測(cè)定每孔OD值。(若無(wú)酶標(biāo)儀,則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定)。
六、檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒靈敏度:0.5ppb
樣本最低檢測(cè)限:5 ppb
回收率:
食品包裝袋…………………………………85±10%
塑料瓶………………………………… 80±10%
精密度:試劑盒的變異系數(shù)均小于10%
七、注意事項(xiàng)
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(20~25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不成線(xiàn)性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;也不要使用過(guò)了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過(guò)了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
6、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
7、在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時(shí)間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到30min。反之,則減短反應(yīng)時(shí)間。
八、貯藏條件及保存期
貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
保存期:該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。