一、概要
三聚氰胺是一種低毒、無味的純白色單斜棱晶體,形似蛋白粉,屬于三嗪類含氮雜環(huán)有機化合物,廣泛應用于塑料、染料、化肥的生產(chǎn)和紡織行業(yè)。由于三聚氰胺分子含氮量很高,只要添加到食品中就可在檢測中造成蛋白質(zhì)含量較高的假象。目前在飼料、牛奶、奶粉、餅干、奶糖等相關產(chǎn)品均發(fā)現(xiàn)有三聚氰胺殘留現(xiàn)象。動物實驗結果表明,三聚氰胺的攝入可能會導致繁殖障礙、膀胱炎、慢性腎炎、腎結石、甚至膀胱癌。現(xiàn)有的檢測三聚氰胺方法如液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、質(zhì)譜電噴射離子技術其樣品前處理復雜、所需儀器昂貴、操作復雜、耗費時間。而使用三聚氰胺ELISA試劑盒能夠既快速又準確的分析樣品中三聚氰胺殘留。
三聚氰胺檢測試劑盒是應用ELISA技術研發(fā)而成的檢測產(chǎn)品,操作時間短于45min,能最大限度地減少操作誤差和工作強度。
二、試驗原理
三聚氰胺檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在酶標板微孔條上預包被三聚氰胺抗原,樣本殘留的三聚氰胺和微孔條上預包被的抗原競爭抗三聚氰胺抗體,同時三聚氰胺抗體與酶標二抗相結合,加入TMB底物顯色,樣本吸光值與其殘留物三聚氰胺成負相關,與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數(shù),即可得出樣本中三聚氰胺的含量。
適用范圍:
三聚氰胺檢測試劑盒可定性、定量檢測牛奶、奶粉、飼料、動物組織和雞蛋等樣本中三聚氰胺的殘留量。
交叉反應率:
三聚氰胺………………………………………………100%
三、檢測步驟:
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板,將不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5、加標準品/樣本:加標準品/樣本50l/孔到對應的微孔中,再加入酶標物50l/孔,再加入抗試劑50l/孔輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫25℃避光環(huán)境中反應30min。
6、洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌工作液300l/孔,充分洗滌5次,每次間隔30s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
7、顯色:加入底物液A液50l/孔,再加底物液B液50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫25℃避光環(huán)境反應15min。
8、測定:加入終止液50l/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測定每孔OD值。(若無酶標儀,則不加終止液用目測法可進行判定)。
四、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度:10ppb
樣本最低檢測限:
牛奶………………………………………………100ppb
雞蛋………………………………………………100ppb
組織………………………………………………100ppb
奶粉…………………………………………… 500ppb
飼料…………………………………………… 500ppb
回收率:
牛奶………………………………………………… 110±10%
雞蛋………………………………………………… 90±10%
組織………………………………………………… 80±10%
奶粉………………………………………………… 80±10%
飼料………………………………………………… 80±10%
精密度:
試劑盒的變異系數(shù)均小于10%
五、貯藏條件及保存期
貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
保存期:該產(chǎn)品有效期為12個月。