產品簡介及操作步驟：

一、概要
黃曲霉毒素是一類真菌（如黃曲霉和寄生曲霉）的有毒的代謝產物，它們具有很強的致癌性，主要存在于谷物、堅果、棉籽以及一些和人類血液，動物飼料相關的產品中。黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產物，也是一種強致癌物質。牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。Aflatoxin M1的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)，薄層層析法(TLC)等。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。
本試劑盒是應用ELISA技術研發(fā)的新一代真菌毒素檢測產品，操作時間短于60min，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。

二、試驗原理
黃曲霉毒素M1檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被黃曲霉毒素M1抗原，樣本中黃曲霉毒素M1和此抗原競爭黃曲霉毒素M1抗體，同時黃曲霉毒素M1抗體與酶標二抗相結合，經TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的黃曲霉毒素M1成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中黃曲霉毒素M1的含量。

三、黃曲霉毒素M1檢測試劑盒適用范圍:可定性、定量檢測牛乳及其他乳制品等樣本中的黃曲霉毒素M1。

四、使用單位需自備的設備及試劑
設備：
┅┅微孔板酶標儀450nm/630nm
┅┅振蕩器
┅┅離心機
┅┅天平：感量0.01g
┅┅微量移液器：單道 20l～200l、200l～1000l、多道 250l
┅┅刻度移液管：25ml
┅┅洗耳球
┅┅三角瓶：100ml
┅┅聚苯乙烯離心管：10ml/50ml
試劑：
----去離子水

五、提供的材料與試劑
組份名稱、酶標板、高濃度標準品（810ppb）、AFM1酶標物、AFM1抗試劑、底物液A液、底物液B液、終止液、濃縮洗滌液（10×）、AFM1濃縮樣品/標品稀釋液（4×） 注：試劑盒檢測范圍0.05ppb~4.05ppb

六、溶液的配制
配液1: 樣品/標品稀釋液
配液2: 洗滌工作液
配液3：6個不同濃度的標準液

七、樣本前處理步驟
（一）牛奶
┅┅將含脂牛奶降溫至10℃以下，于3500轉/ min下離心10min；
┅┅用吸管棄去上層脂肪層，下層牛奶液即為待測液。（脫脂牛奶直接測定）
（二）奶粉
┅┅取5g奶粉于100ml三角瓶中，加入25ml蒸鎦水；
┅┅振蕩5min，使其完全溶解；
┅┅之后樣品處理同牛奶樣品處理方法。

八、檢測步驟
測定前應須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
5、黃曲霉毒素M1可致癌，應戴手套操作。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數量的微孔板，將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷凍。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5、加標準品/樣本：加標準品/樣本50l到對應的微孔中，加入AFM1酶標物50l/孔，再加入AFM1抗試劑50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中反應。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液300l/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境反應15～20min。
8、測定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內讀完數據），測定每孔OD值。(若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定)。

九、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒檢測下限：0.05ppb
回收率：牛奶：90±15%
奶粉：85±15%
精密度：試劑盒的變異系數均小于10%

十、注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件：保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到30min（或更長）。反之，則減短反應時間。
9、濃縮洗滌液如有結晶屬正常現象，請加熱溶解后使用。
10、該試劑盒最佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

十一、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。
保存期：該產品有效期為12個月。