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    酶分子的改造技術(shù)

    放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06

    由于酶具有反應(yīng)專一性、催化效率高及反應(yīng)條件溫和等優(yōu)點(diǎn),因此在工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥和環(huán)保等方面已經(jīng)得到越來越多的應(yīng)用。但總體還沒有達(dá)到大規(guī)模應(yīng)用的程度,其主要原因在于酶自身性質(zhì)上的一些不足,如不穩(wěn)定性、對pH的要求嚴(yán)格以及具有抗原性等等。因此,人們希望通過各種方法、按照需要定向地改造酶分子,甚至創(chuàng)造出自然界尚未發(fā)現(xiàn)的新酶,從而適合各行各業(yè)的需要。

    1、改造酶分子的方法

    目前改造酶分子的方法主要有兩種,即化學(xué)修飾法和生物酶工程法。

    化學(xué)修飾法 用化學(xué)方法對酶分子迸行改造,即體外在酶的側(cè)鏈基團(tuán)上接上或去掉一些化學(xué)基團(tuán),從而改變酶的物理化學(xué)性質(zhì),最后達(dá)到改變酶的催化性質(zhì)的目的。

    酶分子的化學(xué)修飾法技術(shù)較簡單。但大多數(shù)酶經(jīng)修飾后,理化及生物學(xué)性質(zhì)會發(fā)生改變,因此應(yīng)根據(jù)具體情況選定修飾方法,同時(shí)應(yīng)注意采取一些保護(hù)性措施來盡量維持酶的穩(wěn)定性及得率。

    生物酶工程法 酶的化學(xué)修飾法并非改造酶的惟一手段。隨著人們對酶的深入研究以及氨基酸一級結(jié)構(gòu)的測定、基因重組技術(shù)的應(yīng)用等,可以徹底地改造、合成并且模擬酶。這也就是生物酶工程的主要內(nèi)容。生物酶工程主要包括基因工程技術(shù)生產(chǎn)酶和蛋白質(zhì)工程技術(shù)改造酶兩方面內(nèi)容。

    基因工程技術(shù)生產(chǎn)酶 自從20世紀(jì)70年代重組DNA技術(shù)建立以來,人們在很大程度上擺脫了對天然酶的依賴;蚬こ痰陌l(fā)展使得人們通過克隆可以比較容易地得到許多種天然的酶基因,并使其在微生物中高效表達(dá),再通過發(fā)酵技術(shù)進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。用基因工程方法生產(chǎn)酶可以大大降低酶產(chǎn)品的成本,同時(shí)可以使稀有酶的生產(chǎn)變得更加容易。

    目前已有100多種酶基因克隆成功,包括尿激酶基因、凝乳酶基因等。其中纖維蛋白溶酶原激活劑和凝乳蛋白酶是應(yīng)用基因工程獲得大量酶的最成功例子。

    人纖維蛋白溶酶原激活劑是一類絲氨酸蛋白酶。能使纖維蛋白溶酶原水解產(chǎn)生有活性的纖維蛋白溶酶,溶解血塊中的纖維蛋白。臨床上用于治療血栓性疾病,促進(jìn)體內(nèi)血栓的溶解。利用工程菌株生產(chǎn)的纖維蛋白溶酶原激活劑在療效上與人體合成的酶完全一效,目前已用于臨床試驗(yàn)。

    凝乳蛋白酶是生產(chǎn)乳酪的必需用酶,其來源有限。從微生物中提取的凝乳蛋白酶常會引起乳酪苦味。因此,人們克隆了小牛凝乳酶基因在酵母系統(tǒng)中表達(dá),得到的凝乳酶與從小牛胃中提取的天然酶性質(zhì)完全一致。

    蛋白質(zhì)工程技術(shù)改造酶 是在基因工程的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,兩者對酶工程的貢獻(xiàn)有所區(qū)別;蚬こ讨饕鉀Q的是酶大量生產(chǎn)的問題,而蛋白質(zhì)工程主要是修飾(或改造)天然蛋白質(zhì),從而獲得具有新的功能的酶或創(chuàng)造全新的酶分子。

    蛋白質(zhì)工程改造酶是改變或去掉酶蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)中的某些氨基酸殘基,從而改變酶相關(guān)的功能,使酶在不影響其他功能的前提下表現(xiàn)出某種新的特性。

    目前酶蛋白質(zhì)工程主要是用于工業(yè)用酶的改造,例如,洗衣粉中添加的枯草芽孢桿菌蛋白酶以加強(qiáng)去污能力,但這種酶在漂白劑的作用下易失去活性,F(xiàn)在利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)將酶蛋白分子中的氨基酸進(jìn)行替代,使酶的抗氧化能力大大提高,因而可與漂白劑同時(shí)使用。

    利用蛋白質(zhì)工程還可以設(shè)計(jì)新酶。從目前蛋白質(zhì)工程發(fā)展的水平來說,設(shè)計(jì)全新的酶還有一定的困難,但隨著蛋白質(zhì)化學(xué)、蛋白質(zhì)晶體學(xué)、酶學(xué)等相關(guān)學(xué)科研究的深入,必然會使蛋白質(zhì)工程發(fā)展剄一個(gè)更高的層次上。

    2、改造酶分子的新思路

    近年來,抗體酶的發(fā)展為酶分子設(shè)計(jì)提供了一個(gè)全新的思路。它打破了化學(xué)酶工程和生物酶工程的界限,結(jié)合了免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、化學(xué)等技術(shù),制備出具有高度底物專一性及特殊催化活力的新型催化抗體。人們預(yù)測,隨著新生物工程技術(shù)和噬菌體抗體庫技術(shù)的發(fā)展,將有更先進(jìn)的重組技術(shù)用來直接從抗體庫中篩選催化抗體。

     

     

     
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