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    葛根含量測定方法(葛根素)

    放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2007-05-14

       葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。2005版《中國藥典》一部采用高效液相色譜法測定其葛根素的含量。
        一、高效液相色譜法
        2005版《中國藥典》葛根含量測定項(xiàng)下:
        色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-水(25:75)為流動(dòng)相;檢測波長為250nm。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不得低于4000。
        供試品溶液的制備:取本品粉末約0.1g,精密稱定,置錐形瓶中,精密加入30%乙醇50ml,稱定重量,加熱回流30分鐘,放冷,再稱定重量,用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
        HPLC法測定葛根及其制劑中葛根素的含量時(shí),使用最多的流動(dòng)相系統(tǒng)為甲醇-水系統(tǒng),另外還有甲醇-水,加醋酸調(diào)節(jié)pH等。
        A:以甲醇-水為系統(tǒng)的,常見的比例及實(shí)驗(yàn)條件為:
        ①Waters2695/ 2996/ Empower 色譜系統(tǒng);色譜柱Symmetry C18 柱( 3.9mm×150mm, 5μm);流動(dòng)相:甲醇-水(25:75);DAD檢測波長254nm;柱溫35℃。
        ②SP8800 型高效液相色譜泵;Hypersil ODS (4.6mm×250mm,5μm大連依利特科學(xué)有限公司);流動(dòng)相:甲醇-水(30:70);柱溫40℃;檢測波長250nm。
        ③Waters高效液相色譜儀;十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(4.6mm×250mm,5μm);甲醇-水(40:60)為流動(dòng)相;檢測波長為250nm;柱溫30℃。
        ④美國Spectra-Physics 液相色譜儀;色譜柱Lunm C18 (150mm×4.6mm, 5μm ) 不銹鋼柱(美國Phenom enex 公司);流動(dòng)相為甲醇-水(28:72);檢測波長250nm;柱溫30℃。
        B:乙腈-水系統(tǒng):
        ①LC-10ATvp高效液相色譜儀;Hypersil ODS 色譜柱(4.6mm×150mm,5μm);乙腈-水(15:85)為流動(dòng)相;檢測波長250nm。
        ②TSP 高效液相色譜儀;色譜柱Turner C18H37(5μm,4.6mm×150mm);流動(dòng)相:乙醇-水(43:207);柱溫30℃;檢測波長250nm。
        C:加酸調(diào)節(jié)的,如:
        ①LC-10A高效液相色譜儀;色譜柱為ODSC18柱(5μm,4.6mm×150mm);流動(dòng)相為甲醇-水(35:65),內(nèi)含0.01%醋酸;柱溫35℃;檢測波長251nm。
        ②SP-8800高效液相色譜儀;色譜柱ODS-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇-1.4%醋酸溶液( 22:78 );柱溫室溫;測定波長: 250nm。
        ③美國Beckman公司高效液相色譜儀;Hypersil ODS柱(2.5μm,4.6mm×250mm);流動(dòng)相為甲醇-氯仿-1.5%冰醋酸(22:1:77);檢測波長250nm。
        ④SP1000 高效液相色譜泵;色譜柱YMC C18不銹鋼柱(4.6mm×150mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇-水醋酸(42∶100:0.2);檢測波長250nm;柱溫:室溫。
        其它如:呂竹芬等測定心血寧滴丸中葛根素的含量,采用高效液相色譜法,Dikma piamonsil C18色譜柱(4.6mm×200mm,5μm),以甲醇-乙腈-水(30:2 :65)為流動(dòng)相,流速為1.0mL/min,檢測波長250nm。
        顏春華等測定腦得生片中葛根素的含量,采用日本島津LC-4A高效液相色譜儀;色譜柱DiamonsilTM (鉆石) C18(200mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈-甲醇-0.1%枸櫞酸溶液(5:25:75);紫外檢測波長250nm;柱溫室溫。
        制備樣品溶液時(shí),一般以30%乙醇、50%乙醇、乙醇、甲醇、流動(dòng)相或鹽酸溶液(9→1000)等為溶劑,采用超聲法提取。

        二、其它
        楊振林等測定葛根沖劑中葛根素含量,采用薄層- 紫外分光光度法,751GD 型分光光度計(jì)(上海分析儀器總廠)。薄層層析硅膠G板,以氯仿-甲醇-水(7:28:0.2)為展開劑,在紫外燈(365nm)下定葛根素位置,刮下斑點(diǎn),用甲醇洗脫,測定波長為251±1nm。
        崔小兵等測定通脈顆粒劑中葛根素及阿魏酸的含量,采用雙波長(λ1= 250nm ,λ2=313nm) 梯度洗脫法。Waters 2690 型高效液相色譜儀;色譜柱Kromasil C18柱(4.6mm×250mm,5μm);柱溫為30℃,甲醇-1%醋酸水梯度洗脫;檢測波長為250nm;柱溫30℃。
        方崇波等采用離子絡(luò)合紫外分光光度法測定葛根素及其制劑的含量,采用UV4/2401 紫外分光光度計(jì)(島津)。方法::在pH=4.0條件下,葛根素和Al3+形成絡(luò)合物,在339.8 nm波長處通過測定吸收度的改變來測定含量。

     
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