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    氨基酸總量(氨態(tài)氮)的測(cè)定

    放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2005-10-08

    一、目的與原理:

    1、了解掌握單指示劑與雙指示劑甲醛滴定法測(cè)氨基酸總量的方法與原理:

       二、單指示劑甲醛滴定法:

       (一)原理:氨基酸具有酸、堿兩重性質(zhì),因?yàn)榘被岷?COOH基顯示酸性,又含有-NH2基顯示堿性。由于這二個(gè)基的相互作用,使氨基酸成為中性的內(nèi)鹽。當(dāng)加入甲醛溶液時(shí),-NH2與甲醛結(jié)合,其堿性消失,破壞內(nèi)鹽的存在,就可用堿來(lái)滴定-COOH基,以間接方法測(cè)定氨基酸的量,反應(yīng)式可能以下面三種形式存在。

       

    (二)試劑

    (1)40%中性甲醛溶液,以麝香草酚酞為指示劑,用1N NaOH溶液中和。

    (2)0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。

    (3)0.100N氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。

    (三)操作步驟:

    稱(chēng)取一定量樣品(約含20毫克左右的氨基酸)于燒杯中(如為固體加水50毫升),加2-3滴指示劑,用0.1OON NaOH溶液滴定至淡藍(lán)色。加入中性甲醛20毫升,搖勻,靜置1分鐘,此時(shí)藍(lán)色應(yīng)消失。再用0.1OON NaOH溶液滴定至淡藍(lán)色。記錄兩次滴定所消耗的堿液毫升數(shù),用下述公式計(jì)算

    計(jì)算:

            氨基酸態(tài)氮(%)=( N V×0.014×100)/W                                

    式中:

    N:NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液當(dāng)量濃渡。

    V:NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗的總量(m1)

    W:樣品溶液相當(dāng)樣品重量(克)。

    0.014:氮的毫克當(dāng)量。

    三、雙指示劑甲醛滴定法:

    (一)原理:

    與單色法相同,只是在此法中使用了兩種指示劑。從分析結(jié)果看,雙指示劑甲醛滴定法與亞硝酸氮?dú)馊萘糠?SPAN lang=EN-US>(此法操作復(fù)雜,不作介紹)相近單色滴定法稍偏低,主要因?yàn)閱沃甘緞┘兹┑味ǚㄊ且园被崛芤篜H值作為麝香草酚酞的終點(diǎn)。PH值在9.2,而雙指示劑是以氨基酸溶液的PH值作為中性紅的終點(diǎn),PH值為7.0,從理論計(jì)算看,雙色滴定法較為準(zhǔn)確。

        (二)試劑:

        (1)三種試劑同單指示劑法

        (2)0.1%中性紅(50%乙醇溶液)

        (三)操作步驟:

        取相同的兩份樣品,分別注入100毫升三角燒瓶中,  一份加入中性紅指示劑2-3滴,用0.100N NaOH溶液滴定終點(diǎn)(由紅變琥珀色),記錄用量,另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升,搖勻,以0.100NNaOH準(zhǔn)溶液滴定至淡藍(lán)色。按下述公式計(jì)算。  

    計(jì)算:   

    氨基酸態(tài)氮(%)=( N(V2-V1)×0.014)/W×100

    式中:

    V2:用麝香草酚酞為指示劑時(shí)標(biāo)準(zhǔn)堿液消耗量(毫升)

    V1:用中性紅作指示劑時(shí)堿液的消耗量(m1)。

    N:標(biāo)準(zhǔn)堿液當(dāng)量濃度。

    W:樣品的重量(克)。.

    0.014:氮的毫克當(dāng)量。

    注意事項(xiàng):

    測(cè)定時(shí)樣品的顏色較深,應(yīng)加活性炭脫色之后再滴定.

     
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