2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。

3. 使用0.22 mm濾膜過(guò)濾除菌。

4. 密封瓶口于室溫保存。

注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。

 

 

#Tris-HCl平衡苯酚#

配制方法：

1. 使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無(wú)色的，無(wú)需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160℃對(duì)其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對(duì)DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

 

2. 操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過(guò)的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。

 

3. 苯酚平衡：因?yàn)樵谒嵝詐H條件下DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對(duì)苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

① 液化苯酚應(yīng)貯存于-20℃，此時(shí)的苯酚呈結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。

② 加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時(shí)因其呈黃色，有助于方便識(shí)別有機(jī)相。

③ 加入等體積的1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。

④ 重復(fù)操作步驟③。

⑤ 加入等體積的0.1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。

⑥ 重復(fù)操作步驟⑤，稍微殘留部分上層水相。

⑦ 使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于7.8。

⑧ 將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

苯酚/氯仿/異戊醇 (25 : 24 : 1)

配制方法：

1. 說(shuō)明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯仿/異戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。

2. 配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24 : 1）混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

 

 

#10% (W/V) SDS#

組份濃度：10% (W/V)SDS

配制量：100ml

配制方法：

1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68℃加入溶解

2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2

3.將溶液定容至100ml后，室溫保存。

 

#2 N NaOH#

組份濃度：2 N NaOH

配制量：100 ml

配制方法：

1. 量取80 ml去離子水置于100～200 ml塑料燒杯中（NaOH溶解過(guò)程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。

2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。

3. 待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。

4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。

 

#2.5 N HCl#

組份濃度：2.5 N HCl

配制量：100 ml

配制方法：

1. 在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃鹽酸（11.6 N)，均勻混合。

2. 室溫保存。

 

 

#5 M NaCl#

組份濃度：5 M NaCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 稱取292.2 g NaCl置于1 L燒杯中，加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。

2. 加去離子水將溶液定容至1 L后，適量分成小份。

3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

 

#20% (W/V) Glucose#

組份濃度：20% (W/V) Glucose

配制量：100 ml

配制方法：

1. 稱取20 g Glucose置于100～200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水后，攪拌溶解。

2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。

3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

 

#Solution I(質(zhì)粒提取用)#

組份濃度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose

配制量：1 L

配制方法：

1. 量取下列溶液，置于1 L燒杯中。

2. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。

 

 

#Solution II(質(zhì)粒提取用)#

組份濃度：200mM NaOH，1%(W/V)SDS

配制量：500ml

配制方法：

1.量取下列溶液，置于500ml燒杯中

10% SD 50ml

2N NaOH50ml

2.加滅菌水定容至500ml，充分混勻

3.室溫保存，此溶液保存時(shí)間最好不要超過(guò)一個(gè)月

注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢?/div>

編輯：songjiajie2010