1.6菌種保存
所有菌種均由實驗室專人(雙人雙鎖)保存于專用冰箱或其它保存方式。要建立菌種登記臺帳,詳細記錄菌種采集、保管、制備、使用、處置情況;每一種菌種一定要有檢測鑒定報告(具體的的鑒定方法見菌種質量報告鑒定證書上的方法);
具體菌種保存方法一般為:
將復蘇后肉湯與滅菌甘油按15%甘油比例(肉湯8.5mL+甘油1.5mL)混合,-30 ℃凍存,(可用2mL凍存管凍存多管),作為保藏儲備菌株F1代,也可使用商品化的菌種保存管。
1.7菌種的傳代
1.7.1標準菌株的復蘇:
① 菌種操作應在無菌條件下進行,防止雜菌污染。
② 每次使用和復蘇時只需將小珠在平板上滾動或置肉湯中培養(yǎng)。
1.7.2標準儲備菌株每轉接一次須進行確認。(確認方法一般為他們各自獨有的形態(tài),在鑒別培養(yǎng)基上的形態(tài))
1.7.3工作菌株轉接的方法:
①、配制營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(溶血性弧菌加3%氯化鈉 ),121℃高壓滅菌15分鐘后分裝在試管內,冷卻后備用。
②、在無菌條件下,用接種環(huán)挑取菌苔至新鮮試管上作“米”字形劃線接種,放置在36℃的培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24小時。
1.7.4工作菌株的使用
1.7.4.1內部質量控制:一個月一次陽性對照、培養(yǎng)基每批驗收;
1.7.4.2外部質量控制:能力驗證、實驗室比對;
1.7.5工作菌株的期間核查
1.7.5.1期間核查的頻率:每半年對使用標準菌株進行一次期間核查。
1.7.5.2工作菌株期間核查的方法及依據(jù):同工作菌株的確認一樣。
1.7.5.3建立標準菌株期間核查記錄。
1.8菌種的標識和使用期限:
1.8.1標識:菌種代數(shù)的計算為干粉菌種為第0代,轉接一次加一代。具體標識為:例單增李斯特氏菌第0代,標識為DZ-0,第一代標識為DZ-01第一代有12支,則DZ-01-01、……、DZ-01-12;并標明日期:如2016.02.13這樣填寫。
1.9 菌種的保藏
1.9.1將試管內菌種放入冰箱中2~8℃冷藏保存。
1.9.2將傳代并經(jīng)過培養(yǎng)后的菌種放入冰箱中2~8℃保存。每支保存菌種需標明菌名、標準編號、傳次、傳代日期。
1.10菌種的銷毀
1.10.1菌種使用后或超過貯存期的應進行銷毀。
1.10.2需銷毀的菌種,應用高壓蒸汽(121℃)滅菌30分鐘。
1.10.3滅菌后,再進行清洗和處理。
1.10.4銷毀的菌種應做好記錄。銷毀時由化驗負責人監(jiān)督銷毀,保管人員負責銷毀。