進行培養(yǎng)時，動作要準確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動，增加污染機會。不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。

為拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應是右手使用的東西放置在右側，左手用品在左側，酒精燈置于中央。工作由始至終要保持一定順序性，組織或細胞在未做處理之前，勿過早暴露在空氣中。

同樣，培養(yǎng)液在未用前，不要過早開瓶；用過之后如不再重復使用，應立即封閉瓶口直立可增加落菌機會。吸取營養(yǎng)液、PBS、細胞懸液及其它各種用液時，均應分別使用吸管，不能混用，以防擴大污染或導致細胞交叉污染。

工作中不能面向操作野講話或咳嗽，以免唾沫把細菌或支原體帶入工作臺面發(fā)生污染。操作前用酒精擦拭超凈臺面及雙手。手或相對較臟的物品不能經過開放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液時如吸管尖碰到瓶口，則應將吸管丟掉。

在開始實驗前要制定好實驗計劃和操作程序。有關數(shù)據(jù)的計算要事先做好。根據(jù)實驗要求，準備各種所需器材和物品、清點無誤后將其放置操作場所（培養(yǎng)室、超凈臺）內，然后開始消毒。這可以避免開始實驗后．囚物品不全往返拿取而增加污染機會。

無菌培養(yǎng)室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面—次（拖布要專用）．紫外線照射消毒30-50min，超凈工作臺臺面每次實驗前要用75％酒精擦洗。然后紫外線淌毒30min。

在工作臺面消毒時切勿將培養(yǎng)細胞和培養(yǎng)用液同時照射紫外線，消毒時工作臺面上用品不要過多或重疊放置．否則會遮擋射線降低消毒效果�！�些操作用具如移液器、廢液缸、污物盒、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺內同時紫外線消毒。

體外培養(yǎng)細胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是決定培養(yǎng)成功或失敗的首要條件。即便使用設備完善的實驗室。若實驗者粗心大意，技術操作不規(guī)范,也會導致污染。因而．為在一切操作中為最大可能的保證無菌．每一項工作都必須做到有條不紊和完全靠。

穿實驗服、佩戴口罩和滅菌手套，長頭發(fā)的同學應把頭發(fā)扎在腦后，佩戴的手套的上緣應該與實驗服的袖口重疊在一起，就是把袖口末端塞進手套內，并于開始操作前要用75％酒精消毒手。

如果實驗過程中手觸及可能污染的物品和出入培養(yǎng)室都要重新用消毒液洗手。

灼燒是一種可以去除顆粒性灰塵或棉絨的有效辦法，火焰也會造成附近的氣流上升，避免灰塵沉降。

在無菌環(huán)境進行培養(yǎng)或做其它無菌工作時，首先要點燃酒精燈。以后一切操作，如按裝吸管帽、打開或封閉瓶口等，都需在火焰近處并經過燒灼進行。

開啟、關閉長有細胞的培養(yǎng)瓶時，火焰滅菌時間要短。防止因溫度過高燒死細胞。另外膠塞過火焰時也不能時間長，以免燒焦產生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞。

但是，在生物安全柜內，點燃酒精燈進行灼燒是不合適的。

 

生物安全柜工作時，會為內部空間提供一個穩(wěn)定的層流，但酒精燈的火焰會對它產生干擾，進而影響內部的無菌環(huán)境，提高了生物污染的風險。

對于小體積移液，一般特指小于1mL的液體轉移，因為其體積小，通常需要使用移液器來操作。

而小體積的移液吸頭比較短，在吸液的過程中有可能出現(xiàn)移液器下端也進入瓶皿內部的情況。

此時就需要特別注意，不能讓移液器碰觸到瓶皿內壁，如果碰觸了，則應該立即使用70%乙醇清潔移液器下端，然后才可以繼續(xù)往下進行實驗操作。

對于大體積移液，例如5/10/25mL或以上的液體轉移，可以用大量程的移液吸頭或大量程的電動移液器輔助移液。

但不管是什么體積的移液，都應該確保吸頭或移液管的末端內是含有棉花或透氣膠塞的，這樣可以有效避免因為移液過程中，液體吸入移液器內部造成污染。

但由于大體積移液的液體轉移速度快、量大，有時候即使有棉花，也會出現(xiàn)液體被吸入移液器內的現(xiàn)象，這時就只能停止實驗，或改用其他未被污染的移液器來操作了。

關于溶液傾倒，有時液體的轉移不需要特別精準，會把溶液從一個瓶內直接倒入另一個瓶內或管內。

在操作時，需要注意溶液從原來的容器中倒入新的容器時，瓶口應保持懸空，而不是直接接觸新容器的瓶口邊緣來完成液體轉移。

因為后者會容易出現(xiàn)液橋，即液體在兩個挨得很近的接觸面之間形成的水柱，這樣的水柱容易被微生物進入；同時，在傾倒的時候也要注意不要讓液體流淌在容器的外表面，因為這樣也會提高微生物污染的風險。