采樣原則：所采集的樣品具有代表性。

采樣容器:不能是新的污染源:不吸收或吸附某些待測(cè)組分不與待測(cè)組分發(fā)生反應(yīng)。保證從采樣到分析期間樣品各組分的濃度不發(fā)生改變。

微生物樣品必須按一般無(wú)菌操作的基本要求采集,并保證在運(yùn)送、貯存過(guò)程中不受污染。

所需培養(yǎng)基和試劑：營(yíng)養(yǎng)瓊脂、9ml無(wú)菌生理鹽水管。

操作步驟：

1.以無(wú)菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL充分混勻的水樣,注入滅菌平皿中。

2.傾注約15mL已融化井冷卻到45℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,并立即旋搖平皿,使水與培養(yǎng)基充分混勻（每次檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)做一平行接種,同時(shí)另用一個(gè)平只傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂養(yǎng)基作為空白對(duì)照）

3.待冷卻凝固后,翻轉(zhuǎn)平皿,使底面向上,置于36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h±2h,進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),即為水樣1mL中的菌落總數(shù)。

4.培養(yǎng)完成后，用眼睛直接觀察,必要時(shí)用放大鏡檢查,以防遺漏。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理:

若菌落數(shù)在100以?xún)?nèi)時(shí)按實(shí)有數(shù)報(bào)告,大于100時(shí),采用兩位有效數(shù)字,在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值,以四舍五入方法計(jì)算,為了縮短數(shù)字后面零的個(gè)數(shù)也可用10的指數(shù)來(lái)表示(見(jiàn)表1)。

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB5749-2022)規(guī)定生活飲用水菌落總數(shù)每毫升不得超過(guò)100個(gè)。

操作步驟：

1.以無(wú)操作方法吸取1mL充分混勻的水,注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中,混勻成1:10稀釋液。

2.吸取1:10的稀釋液1ml，注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中,混勻成1:100稀師液,按同法依次稀釋成1:1000,1:1000釋液等備用（如此遞增稀釋一次,必須更換一支1m滅菌管）。

3.然后用無(wú)菌極管取稀釋的水樣和2個(gè)~3個(gè)適釋度的水樣1mL,分別注入滅菌平皿內(nèi)。之后操作同自來(lái)水水樣的檢驗(yàn)步驟。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理:

計(jì)算平均菌落數(shù)，首先選擇平均菌落在30~300之間者進(jìn)行計(jì)算。

計(jì)算方法和報(bào)告方式：

一般水源水中菌落總數(shù)與水清潔程度的關(guān)系：

所需培養(yǎng)基和試劑：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基。

多管發(fā)酵法步驟:

初步發(fā)酵試驗(yàn):采用乳糖蛋白培養(yǎng)液36℃±1℃培養(yǎng)18-24h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。

平板分離:

將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，于36 ℃士1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18 h~24 h,觀察菌落形態(tài),挑取符合下列特征的菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢:

--深紫黑色.具有金屬光澤的菌落﹔

--紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落﹔

--淡紫紅色、中心較深的菌落。

復(fù)發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn):

經(jīng)上述染色鏡檢為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌,同時(shí)接種乳糖蛋白豚培養(yǎng)液,置36 ℃士1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h士2h,有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者,即證實(shí)有總大腸菌群存在。

結(jié)果報(bào)告(MPN):根據(jù) GB5750.12-2022 所附檢索表報(bào)告結(jié)果。

所需培養(yǎng)基和試劑：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、EC肉湯、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基

多管發(fā)酵法步驟:

初步發(fā)酵試驗(yàn):采用乳糖蛋白培養(yǎng)液36℃±1℃培養(yǎng)24h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。

耐熱培養(yǎng):陽(yáng)性管接種在EC肉湯管中，44.5℃培養(yǎng)24h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。

平板培養(yǎng):陽(yáng)性管接種在EMB平板上，36℃±1℃培養(yǎng)24h。

結(jié)果報(bào)告(MPN):根據(jù) GB5750.12-2023 所附檢索表報(bào)告結(jié)果。

所需培養(yǎng)基和試劑：EC-MUG培養(yǎng)基

多管發(fā)酵法步驟:

耐熱培養(yǎng):將總大腸菌群初發(fā)酵中產(chǎn)酸或產(chǎn)氣的管進(jìn)行大腸埃希氏菌檢測(cè)，接種此類(lèi)試管中的液體到EC-MUG管中，在培養(yǎng)箱或恒溫水浴中44.5℃培養(yǎng)24h。如使用恒溫水浴，在接種后30min內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，使水浴液面超過(guò)EC-MUG管的液面。

結(jié)果報(bào)告(MPN):

將培養(yǎng)后的EC-MUG管在暗處用366nm紫外燈照射，如有藍(lán)色熒光，則表明水樣中含有大腸埃希氏菌。

計(jì)算EC-MUG陽(yáng)性管數(shù)，根據(jù) GB5750.12-2023 所附檢索表報(bào)告結(jié)果。