在實(shí)際工作中存在許多復(fù)雜因素影響微生物學(xué)檢驗(yàn),可能給檢驗(yàn)結(jié)果帶來偏差甚至錯(cuò)誤,因此必須對影響檢驗(yàn)結(jié)果的諸多因素采取控制手段保證檢驗(yàn)結(jié)果的正確性,不斷完善微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制。
1、檢驗(yàn)人員
2、儀器、設(shè)備
注意事項(xiàng):
3、培養(yǎng)基、試劑
4、檢驗(yàn)環(huán)境
5、采樣
6、檢驗(yàn)質(zhì)量
7、校驗(yàn)的執(zhí)行
注意事項(xiàng):
8、標(biāo)準(zhǔn)菌株及其保存
9、檢驗(yàn)報(bào)告及結(jié)果質(zhì)量控制
影響微生物檢驗(yàn)質(zhì)量的因素:
1、檢驗(yàn)人員
2、儀器設(shè)備
3、檢驗(yàn)培養(yǎng)基試劑
4、檢驗(yàn)環(huán)境
5、采樣
6、檢驗(yàn)質(zhì)量
7、檢驗(yàn)的執(zhí)行
8、參考菌株及其保存
9、檢驗(yàn)報(bào)告及其結(jié)果質(zhì)量控制
(1)微生物檢驗(yàn)不能完全依賴全自動(dòng)鑒定儀器,檢驗(yàn)工作中每一步驟均需要高度的主觀分析判斷能力,與個(gè)人的經(jīng)驗(yàn)、技能和微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)水平密切有關(guān)。
(2)除要求微生物檢驗(yàn)人員必須具備嚴(yán)肅認(rèn)真的工作態(tài)度,精密細(xì)致的觀察和操作習(xí)慣,注重個(gè)人衛(wèi)生外,還必須訓(xùn)練掌握微生物檢驗(yàn)技術(shù)。
(3)檢驗(yàn)人員應(yīng)執(zhí)行上崗前培訓(xùn)制度,上崗前培訓(xùn)合格方能上崗操作,還要主動(dòng)參加學(xué)習(xí)、培訓(xùn)、講座、學(xué)習(xí)新技術(shù),掌握微生物學(xué)檢驗(yàn)方法,標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)法律法規(guī)。
(4)參與編寫測試程序及儀器操作程序,學(xué)習(xí)質(zhì)量保證體系知識(shí)和計(jì)量學(xué)基本知識(shí)。
(5)參加各類水平測試和盲樣測試,提高檢測水平和分析問題、解決問題的能力。
(6)微生物負(fù)責(zé)人應(yīng)定期對檢驗(yàn)人員進(jìn)行專業(yè)知識(shí)和操作熟練程度的考核,提高檢驗(yàn)人員的素質(zhì)。
微生物檢驗(yàn)的主要儀器及設(shè)備
冰箱、生物安全柜、超凈工作臺(tái)、冰箱、生物安全柜、超凈工作臺(tái)、高壓滅菌器、培養(yǎng)箱、水浴鍋、pH計(jì)、顯微鏡、烘箱等。
要求所有的儀器和設(shè)備均應(yīng)按照生產(chǎn)廠家的方法和有關(guān)規(guī)定正確使用。
需要強(qiáng)制性定期檢定的儀器和設(shè)備,經(jīng)符合資歷的計(jì)量部門校準(zhǔn)合格后方可使用。
對于常用的貴重儀器和設(shè)備,在使用前應(yīng)加以檢查,使用后要登記,要做到定期維護(hù),以保證儀器處于良好的工作狀態(tài)。
(1)高壓滅菌器
A.操作人員應(yīng)了解高壓滅菌器的原理并遵守操作規(guī)則。
B.放入的滅菌物品不宜放得過擠。
C.使用時(shí)放入生物指示條或化學(xué)指示條;每天用水銀留點(diǎn)溫度計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn)。
D.每季度用生物指示劑進(jìn)行監(jiān)控。
注意:實(shí)驗(yàn)室需要使用的無菌器具應(yīng)能正確實(shí)施滅菌,無菌器具和器皿有明顯標(biāo)識(shí)。
(2)培養(yǎng)箱
A.箱內(nèi)不應(yīng)放入過熱或過冷的物品,取放物品時(shí)應(yīng)隨手關(guān)閉箱門,以維持恒溫。
B.如培養(yǎng)物不慎潑灑到箱內(nèi),應(yīng)馬上清潔,并采取必要的消毒措施。
C.培養(yǎng)物不宜與培養(yǎng)箱四周及最低層直接接觸。
D.每天記錄溫度的變化,如有偏差馬上修正或維修。
微生物檢驗(yàn)所用培養(yǎng)基必須由專業(yè)廠家生產(chǎn),產(chǎn)品質(zhì)量必須符合有關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),保存也應(yīng)符合要求,防止潮解、結(jié)塊等。培養(yǎng)基一旦變質(zhì)不得再使用。
(1)培養(yǎng)基的配制應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行操作,并做好配制記錄。
(2)為保證培養(yǎng)基質(zhì)量,在配制時(shí)應(yīng)注意:制備培養(yǎng)基必須在玻璃容器或搪瓷缸中進(jìn)行,如用銅、鐵等金屬器皿可能會(huì)對微生物生長有毒害作用。
(3)使用專用的角匙取樣品避免交叉污染。
(4)配制時(shí)必須使用蒸餾水或去離子水,不得使用自來水。
(5)不同類型的微生物對pH值得要求不同,配制時(shí)應(yīng)測定pH值,如測定結(jié)果與所需要求不符,則用NaOH或HCL溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。
(6)制備好的培養(yǎng)基應(yīng)及時(shí)使用,使用不完的如無特殊要求可室溫或2-8度冷藏保存。
微生物檢驗(yàn)均在檢驗(yàn)室進(jìn)行,即不能讓微生物散布出去,又必須使樣品不再受污染,更不能允許病源菌感染檢驗(yàn)人員,為此檢驗(yàn)室的環(huán)境要求和衛(wèi)生管理制度非常重要。
(1)微生物檢驗(yàn)室要求內(nèi)外環(huán)境整潔,布局合理,操作區(qū)與辦公區(qū)域分開。
(2)洗滌室、培養(yǎng)室、消毒間、無菌室應(yīng)分開,設(shè)有專室。
(3)微生物室應(yīng)備有自動(dòng)或腳踩式洗手池和固定的消毒設(shè)施。
(4)無菌室設(shè)有緩沖間。
(5)定期對操作環(huán)境進(jìn)行消毒
(6)每天進(jìn)行空氣落菌實(shí)驗(yàn)。
(1)采樣工具和容器選用耐消毒滅菌的材料,采樣工具不能使用消毒劑消毒,樣品中不得加入防腐劑,以免影響檢驗(yàn)結(jié)果的正確性。
(2)在嚴(yán)格無菌操作的條件下,按國家規(guī)定的樣品采集標(biāo)準(zhǔn)均勻準(zhǔn)確地采樣,并及時(shí)封口,使樣品具有準(zhǔn)確性和代表性。
(3)每件樣品封口后,貼上標(biāo)簽,做好記錄,一般樣品可在保存在2-8度的環(huán)境中,如是冷凍食品應(yīng)保持在冷凍狀態(tài),并及時(shí)送件。
(4)采樣數(shù)量不能少于全部檢驗(yàn)需要量的3倍,以供檢驗(yàn)、復(fù)檢、備查。
除按國家標(biāo)準(zhǔn)方法對所需檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行檢測外,在實(shí)際工作中應(yīng)還注意以下幾個(gè)方面否則會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性:
(1)在定量檢驗(yàn)時(shí)用重量法還是體積法,檢驗(yàn)結(jié)果會(huì)有誤差,因?yàn)楸戎夭坏扔?的樣品,1ml和lg的檢驗(yàn)結(jié)果絕不會(huì)相等,一般固態(tài)樣品的宜用重量法,液體樣品宜用體積法,但對于粘性液體(如酸牛奶),如用體積法會(huì)粘附一定量的樣品在吸管上,因此此類樣品最好用重量法。
(2)如檢樣需用無菌水或無菌生理鹽水稀釋,則最好用勻質(zhì)器處理制成均勻的菌懸液。
(3)樣品稀釋時(shí)常會(huì)滯留少量樣品在吸管內(nèi)外,應(yīng)多加注意,吸管插入樣品或稀釋液中應(yīng)深淺一致,否則會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果,吸入液體后,應(yīng)沿管壁慢慢注入遞增的稀釋液中特別注意此時(shí)吸管尖端切不可碰到稀釋液中。
(4)在培養(yǎng)基傾注入檢樣、菌懸液時(shí)注意培養(yǎng)基溫度宜在45-50度之間,并使培養(yǎng)基與檢樣菌懸液充分混合。
(5)微生物培養(yǎng)時(shí),應(yīng)根據(jù)要求選擇正確的培養(yǎng)溫度和時(shí)間。
(6)應(yīng)做空白對照,如果在空白對照中檢出細(xì)菌,則可認(rèn)為培養(yǎng)基質(zhì)量存在問題獲在操作過程中存在污染情況。另外采用標(biāo)準(zhǔn)菌種作陽性對照,觀察培養(yǎng)基的質(zhì)量情況。
(7)整個(gè)檢驗(yàn)過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。
(8)及時(shí)檢查結(jié)果,做好原始數(shù)據(jù)記錄。
儀器設(shè)備檔案應(yīng)包含以下內(nèi)容:
(1)儀器名稱、編號(hào)、啟用日期。
(2)常規(guī)校驗(yàn)的方法和校驗(yàn)周期。
(3)可以接受的操作范圍。
(4)儀器功能上的缺陷
(5)常規(guī)維修的曰期
儀器只要不報(bào)廢,維修記錄必須保存。
實(shí)驗(yàn)室應(yīng)預(yù)先制定儀器校驗(yàn)計(jì)劃,并按計(jì)劃對需要強(qiáng)制性定期檢定的儀器和設(shè)備進(jìn)行檢定。
(1)標(biāo)準(zhǔn)菌株可以從國際菌種保藏中心(ATCC、AS、MIG等)或室間質(zhì)控活動(dòng)中獲得,準(zhǔn)確鑒定過的分離株也可使樣。
(2)保存菌株應(yīng)設(shè)專人妥善保管,菌株保存箱應(yīng)加鎖放置,取出使用應(yīng)登記。
(1)對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行整理,用回歸分析法和方差方法進(jìn)行處理,去除不必要的誤差,獲得準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。
(2)應(yīng)注意檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)與衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的表示方法一致,定量檢測以N*10n表示,N為兩位有效數(shù)字。
(3)有關(guān)人員簽字后,加蓋檢驗(yàn)單位印章,以示有效,才能使檢驗(yàn)結(jié)果既有法律依據(jù)又有學(xué)術(shù)依據(jù)。