食品伙伴網(wǎng)注：本方法源自奶牛乳房炎防治技術(shù)指南(試行)（農(nóng)醫(yī)發(fā)[20l0]29號(hào)）

　　引起臨床型乳房炎或者亞臨床型乳房炎的鏈球菌常見的有無乳鏈球菌、停乳鏈球菌以及乳房鏈球菌。

　　1主要試劑和試驗(yàn)方法

　　CAMP試驗(yàn)：在血瓊脂平板上用金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物劃一條直線，然后將鏈球菌培養(yǎng)物劃一條線，與金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物的劃線相互垂直，但不要接觸，二者相距3-5mm，各鏈球菌分離菌劃線間距l(xiāng)0～20mm。置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。在兩劃線交界處出現(xiàn)箭頭樣的溶血區(qū)為陽性。

　　2乳樣的采集

　　選取出現(xiàn)臨床癥狀（或者懷疑為亞臨床型乳房炎）乳房炎奶牛，先用溫水，再用0.2％新潔爾滅擦洗乳房，最后用70％的酒精擦拭乳頭。采樣者同時(shí)進(jìn)行手指擦拭消毒。每個(gè)乳室先擠去頭2～3把奶，以排除污染的雜菌，每頭奶牛取乳樣5mL于無菌乳樣杯中，待檢。

　　3病原菌的分離培養(yǎng)

　　初步診斷：將少量乳汁涂片、革蘭氏染色、鏡檢。如發(fā)現(xiàn)圓球形革蘭氏陽性細(xì)菌可懷疑為鏈球菌。

　　分離培養(yǎng)：將乳樣搖勻，分別取適量接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯（10％血清）、鮮血瓊脂、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（平板）后，置于37℃溫箱培養(yǎng)24～48h。觀察每個(gè)平板中細(xì)菌生長(zhǎng)的情況，記錄菌落生長(zhǎng)表現(xiàn)。

　　普通瓊脂平板上，37℃，24～72h培養(yǎng)后，未見到菌落。

　　鮮血瓊脂平板上長(zhǎng)有灰白色、半透明表面光滑圓形隆起的小菌落，出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，如果是β溶血?jiǎng)t疑為無乳鏈球菌，如果為α溶血，疑為停乳鏈球菌或者乳房鏈球菌，如為γ溶血，則疑為乳房鏈球菌。

　　血清肉湯中生長(zhǎng)初呈均勻渾濁，管底出現(xiàn)絮狀沉淀，上清變得透明。

　　挑取典型菌落涂片、染色、鏡檢，鏡檢如呈球狀，短鏈狀或者長(zhǎng)鏈狀排列，無芽胞、莢膜，革蘭氏染色陽性則疑為鏈球菌。

　　4生化鑒定

　　鏡檢形態(tài)符合鏈球菌特性，且觸酶試驗(yàn)陰性細(xì)菌，即鑒定為鏈球菌屬細(xì)菌。若細(xì)菌CAMP試驗(yàn)陽性，不水解七葉苷和馬尿酸鈉，即鑒定為無乳鏈球菌；若細(xì)菌CAMP試驗(yàn)陰性，不水解七葉苷和馬尿酸鈉，即鑒定為停乳鏈球菌；若細(xì)菌CAMP試驗(yàn)陰性，水解七葉苷和馬尿酸鈉，即鑒定為乳房鏈球菌。

　　5動(dòng)物試驗(yàn)

　　對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，只有停乳鏈球菌具有致病性，將其18h血清肉湯培養(yǎng)物0.5mL注入小白鼠腹腔，或給家兔靜脈接種l～2mL，可使動(dòng)物在1周內(nèi)死亡。對(duì)接種后發(fā)病、死亡小鼠（家兔）的肝臟進(jìn)行病原菌重分離。進(jìn)行菌落涂片、革蘭氏染色、顯微鏡檢查，觀察所分離菌株是否為原接種菌。如果是則進(jìn)一步確定病原菌為停乳鏈球菌。其他兩種鏈球菌并不能使試驗(yàn)動(dòng)物致死。