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    革蘭氏染色技巧

    放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2020-08-17
    核心提示:何為革蘭氏染色:革蘭氏染色是細菌鑒別染色方法中最常使用的,染色結(jié)果可區(qū)分革蘭氏陽性菌及陰性菌,是鑒定細菌最重要的分類依據(jù)
     何為革蘭氏染色:

    革蘭氏染色是細菌鑒別染色方法中最常使用的,染色結(jié)果可區(qū)分革蘭氏陽性菌及陰性菌,是鑒定細菌最重要的分類依據(jù)之一。


    染色有4種試劑

     

    初染劑:結(jié)晶紫,步驟中最先使用的試劑,把細菌染成藍紫色。

    媒染劑:革蘭氏碘液,可與初染劑結(jié)合,形成結(jié)晶紫及碘復合物(CV-I),加強染料顏色的固定。

    脫色劑:95%乙醇,因陽性菌與陰性菌細胞壁構(gòu)造不同,而有不同的脫色反應。

    復染劑:番紅,被上述步驟脫色的細菌,就會被這此試劑染成紅色。


    革蘭氏染色原理:

    革蘭氏染色法是由丹麥微生物學家漢斯-克理斯蒂安-革蘭(Hans Christian Gram)于1884年發(fā)明,至今仍為鑒別細菌之最重要方法。依據(jù)革蘭氏染色法可將細菌分為革蘭氏陽性以及革蘭氏陰性兩類。其染色原理推測與此兩類細菌之細胞壁結(jié)構(gòu)有重大關(guān)系。


    說法有二

    其一為:革蘭氏陰性細菌的細胞壁含脂量高,酒精脫色時會將部份脂質(zhì)萃取出來,而使細胞壁結(jié)構(gòu)松動,通透性增加,故結(jié)晶紫-碘復合體(CV-I)被帶出細菌體外而無色。革蘭氏陽性細菌的細胞壁幾乎不含脂質(zhì),酒精甚至會使細胞壁脫水,故結(jié)構(gòu)更加致密,結(jié)晶紫-碘復合體就被留在細菌體內(nèi)。

    其二為:酒精處理時,會使細菌的細胞壁肽聚醣(peptidoglycan)空隙縮小。革蘭氏陽性細菌之細胞壁肽聚醣較厚,而革蘭氏陰性細菌較薄,所以造成結(jié)晶紫-碘復合體離開革蘭氏陰性細菌的機會較大。故以酒精脫色后,取用紅色的番紅進行復染,此時無色的革蘭氏陰性細菌就會變成粉紅色,而原本已染上藍色的革蘭氏陽性細菌就會變成紫色。


    革蘭氏染色注意事項:

    不論何種染色法,最基本都要先熟習抹片的制作,抹片應厚薄適中,且宜勻而薄,細菌量不宜太多

    染色時,脫色步驟可影響結(jié)果正確與否,脫色過度會使初染劑流失,使革蘭氏陽性細菌變?yōu)楦锾m氏陰性細菌的顏色:但脫色不足,則無法完全去除CV-I復合物,結(jié)果使革蘭氏陰性細菌呈現(xiàn)革蘭氏陽性細菌的顏色。此步驟非常需要經(jīng)驗的累積。

    每種染劑之間,以蒸餾水或無菌水充分清洗,以除去剩余的染液。

    宜使用18-24小時培養(yǎng)的新鮮菌落,因老化的細菌易失去保留初染劑的能力,而顯示出錯誤的結(jié)果,可能部分染成紅色,部分呈紫色。

    建議每次染色時,可以帶品管玻片一起染色,確定染色時間及步驟正確。


    編輯:songjiajie2010

     
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