對已衰退的菌種(群體)進行純種分離和選擇性培養(yǎng),使其中未衰退的個體獲得大量繁殖,重新成為純種群體的措施。狹義的復壯是一消極措施,一般指對已衰退的菌種進行復壯;廣義的復壯是一積極的措施,即在菌種的生產(chǎn)性狀未衰退前就不斷進行純種分離和生產(chǎn)性狀測定,以在群體中獲得生產(chǎn)性狀更好的自發(fā)突變株。
1、定義
菌種退化是指群體中退化細胞在數(shù)量上占一定比例后,所表現(xiàn)出群體性能變差的現(xiàn)象。因此,在已經(jīng)退化的群體中,仍然有一定數(shù)量尚未退化的個體。
2、復壯的方法
純種分離法
在衰退菌種的細胞群中,一般還存在著仍保持原有典型形狀的個體。通過純種分離法,設(shè)法把這種細胞挑選出來即可達到復壯的效果。純種分離方法極多,大體可分為兩類,一類較粗放,可達到“菌落純”水平(pure culture in colony level);另一類較精細,可達到“菌株純”的水平(pure culture in strain level),現(xiàn)表解如下:
菌落純 | 平板表面涂布法 |
平板劃線分離法 | |
瓊脂培養(yǎng)基澆注法 | |
細胞純 | 用“分離小室”進行單細胞分離 |
用顯微操縱器進行單細胞分離 | |
用菌絲尖端切割法進行單細胞分離 | |
用激光鑷子技術(shù)從毛細管中分離 |
通過宿主體內(nèi)復壯
對于因長期在人工培養(yǎng)基上移種傳代而衰退的病原菌,可接種到相應的昆蟲或動、植物宿體中,通過這種特殊的“選擇性培養(yǎng)基”一至多次選擇,就可從典型的病灶部位分離到恢復原始毒力的復壯菌株。例如,經(jīng)長期人工培養(yǎng)的Bacillus thuringiensis會發(fā)生毒力減退和殺蟲效率降低等衰退現(xiàn)象。這時,就可將已衰退的菌株去感染菜青蟲的幼蟲,然后再從最早、最嚴重罹病的蟲體內(nèi)重新分離出產(chǎn)毒菌株。
淘汰已衰退的個體
有人發(fā)現(xiàn),若對S. microflavus “5406”農(nóng)用抗生菌的分生孢子采用-10℃~-30℃的低溫處理5~7天,使其死亡率達到80%左右。結(jié)果會在抗低溫的存活個體中留下未退化的個體,從而達到了復壯的效果。
3、適用情況編輯一般情況下,對于生產(chǎn)企業(yè),菌種管理都要求對菌種進行定期的分離純化,也就是說分離篩選一般都是在退化之前就進行的一中常規(guī)工作,是防止菌種退化或者生產(chǎn)育種而采取的一中積極措施。另外,在出現(xiàn)發(fā)酵水平較高和較低的情況下,也會進行菌種的分離篩選。前者的目的是期望從發(fā)酵液中分離出高產(chǎn)菌株,而后者則是期望從可能已經(jīng)退化的種子中分離出尚未退化的菌株。