以石蠟制作的切片,可以制成極薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。而石蠟切片不但可以達到這個要求,甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。這一點是冰凍切片和火棉膠切片難以獲得的結果。另外,石蠟切片還便于制作大批的或是連續(xù)的切片。而且以石蠟包埋的組織塊便于長期保存。所以石蠟切片是目前各種切片制作方法中最普通常用的一種方法。
一、切片前的準備:
1、恒溫水浴 鍋首先預熱至35℃—40℃。
2、蠟塊整修,將蠟塊組織面的石蠟用刀修去,使組織全部暴露出切面并修平,以減少切片刀的磨損。將組織塊左右兩側的石蠟在不損傷組織及影響診斷的原則上,全部切除;否則切片容易皺褶。組織塊上下邊緣的石蠟視組織情況修齊修平;石蠟不須留得過多,應盡量少留,以保持組織間距的最小限度。這樣切下的切片既呈帶狀,也不彎曲。片距小,在貼片時就可相應多貼片,有利于檢查診斷。修切蠟塊時只能一點一點地切掉蠟邊,要是大片修切易使蠟塊斷裂露出組織;遇此情況應返入新蠟再次包埋。
3.載玻片應事先洗滌干凈,無油膩和不透明現(xiàn)象,應將載玻片浸入酸缸內12小時后流水沖洗,再烤干備用。根據切片需要張數,每片涂上一層極薄的蛋白甘油,插于載片板(或載片架)上備用。
蛋白甘油的配制:取新鮮雞蛋1份加甘油1份再加適量麝香草酚攪勻。此法主要是防止脫片,實際上一張很清潔的載玻片不涂蛋白甘油也不會脫片。
4、將鋒利的刀片裝入切片刀夾鉗內,調整角度和位置后隨即緊固,檢查切片刀的傾斜度是否正確,傾角過大、則切片上卷;傾角過小則切片皺起,以20°-30°為佳。
5、備用小型毛筆、小型無鉤鑷子、鉛筆。
二、切片的步驟:
1、將蠟塊固定于切片機頭上的夾座內,調整到稍離開切片能夠切到的位置上,注意蠟塊組織切面與切片刀口要垂直平行。
2、再調整蠟塊組織切面恰好與刀口接觸,旋緊刀架,固定好機頭。
3、根據需要調整切片厚度。
4、搖動切片機手輪先進行修整切片,直到切出完整的最大組織切面后,再進行切制。
5、實踐中可用右手轉動切片機手輪,左手用毛筆托起蠟片,協(xié)調地進行切片操作。
6、切下的切片帶,一端用鑷子輕輕拉起,應盡可能將切片帶拉直展開,用毛筆將切片帶從刀口向上挑起,拉下切片帶,然后輕拖鋪于恒溫水面上。
三、切片的注意事項
1、切片質量的好壞,除與技術熟練程度和切片機的好壞有關外,切片刀是決定的因素,所以刀一定要磨得十分鋒利。否則在切片時會自行卷起或皺起,或將組織劃傷出現(xiàn)刀痕,更不能順利地將切片切成連續(xù)地長條帶狀。切片刀如有缺口存在,將使制成的切片斷裂、破碎,不完整,切片時應時時擦凈刀口。
2、切片機的各個零件和螺絲應旋緊,否則將會產生震動。在每次更換蠟塊時,應習慣地檢查一下組織塊是否夾緊,切片刀是否穩(wěn)固,稍有疏忽就會影響切片質量,甚至將蠟塊全部切壞,造成不可彌補的后果。在切制切片的開頭階段如出現(xiàn)切制不良與其他故障,最常見的原因是蠟塊或切片刀的松動所致。
3、在搖動切片機時,用力要求均勻一致,不宜過重過猛,否則可因用力過重而使機身震動,造成切片厚薄不均。遇有硬化過度的腦、肝、脾等組織時,更應該輕輕切削,以防組織由于震動形成空洞現(xiàn)象。
4、在夏秋季節(jié)進行切片時,應使用冰塊加強冷卻,這樣不僅可保持石蠟的硬度,同時也減少了切片的褶皺,給切片制作帶來方便。
四、貼片 :
1、將單張或數張切片,用鑷子夾住蠟片的一邊并提起,鋪于恒溫水中,(光亮的一面朝下)立即用毛筆輕輕拉展以切片無皺褶為最好。如有皺褶時用鑷子細心地逐個輕輕撥開,注意不可撥破組織。然后分開每張切片,選取其中最完整的,沒有皺褶的切片。
2、待切片在恒溫水內充分攤開展平后,將載玻片垂直插入水中以涂有蛋白甘油面輕靠切片,并用毛筆將切片一邊撥于玻片上,隨即將玻片直立提起,趁玻片上仍有少量水份時用毛筆,撥正切片位置。如組織較小,可在玻片上多貼幾片或幾排,但排列應密集、整齊。
3、用鉛筆在玻片一端的毛玻璃上寫上標本編號,字要寫得小而清楚、端正。
4、將附貼好的切片置于60℃恒溫箱 內干燥2小時,蛋白質凝固后即可進行染色。