分光光度計(jì)根據(jù)波長(zhǎng)不同主要是分為三種:紫外分光光度計(jì)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、和近紅外分光光度計(jì)。我們今天主要說(shuō)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。
A段(190-340)nm、B段(340-900)nm、C段(900-2600)nm由下圖可知,分光光度計(jì)可分為四個(gè)等級(jí),我們常用的一般都是Ⅲ或Ⅳ級(jí)。
紫外區(qū)主要是氘燈,氘燈提供的光源在(180~375)nm,關(guān)于氘燈的壽命大概在1000小時(shí)左右,可見(jiàn)區(qū)主要是用的鎢燈,鎢燈提供的光源在(320~2500)nm,鎢燈就是我們小時(shí)候用的電燈泡,壽命的話比氘燈要長(zhǎng)點(diǎn),具體儀器得具體分析了(1000-2000)h左右。
大家需要注意的是不同的光區(qū),使用不同的吸收池,紫外區(qū)用的是石英吸收池,可見(jiàn)區(qū)用的是玻璃吸收池。不容易被磨損的,就是石英吸收池。還有一種比較容易的辦法,就是石英吸收池和玻璃吸收池,在紫外區(qū)有不同的吸光度,在250nm波長(zhǎng)時(shí),如果吸光度<0.07Abs的就是石英吸收池。
吸光度的范圍:由于分光光度計(jì)原理是根據(jù)朗伯-比爾定律,我們做樣品時(shí),盡可能的將吸光度控制在1以內(nèi),具體原因有興趣的可以去計(jì)算。
關(guān)于分光光度計(jì)預(yù)熱時(shí)間,一般要求在20min左右。這個(gè)也很好理解,就是小時(shí)候那種家用燈泡,剛開(kāi)啟時(shí)沒(méi)有那么亮,等段時(shí)間后會(huì)慢慢變亮。穩(wěn)定后,我們做樣品才能穩(wěn)定可靠。
透射比和吸光度的換算:分光光度計(jì)上就這兩個(gè)測(cè)量量,透射比和吸光度什么關(guān)系呢?吸光度 = -log(透射比)。